萝卜几丁质结合蛋白的冷诱导、分离纯化及分子特性研究

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该论文对萝卜几丁质结合蛋白CBP1、CBP2的冷诱导、分离纯化、酶学特性及分子结构进行了较系统地研究.主要研究结果如下:1.萝卜块根CBP的冷诱导研究发现新鲜萝卜在0℃左右的低温下冷处理一周以上,可诱导其溶菌酶活力提高约3.8倍,低温冷诱导的机制目前还不清楚,有待进一步研究.2.萝卜块根CBP的分离纯化从萝卜块根粗提液中经脱氨再生几丁质凝胶亲和柱层析得到了一组几丁质结合蛋白,经双向电泳鉴定,表明这组几丁质结合蛋白至少含有4种组份.进一步经CM-纤维素阳离子交换柱层析,得到了其中两个具溶菌酶活性的几丁质结合蛋白组份:CBP1和CBP2.又进一步经聚丙烯酰胺凝胶(Bio-Gel P60 Gel)柱层析,最后经SDS-PAGE电泳鉴定,二者均已达到电泳纯,且其纯度已达到了蛋白质测序和肽质量指纹图谱分析的要求.以下着重对这两个组份进行了深入研究.3.萝卜CBP1、CBP2的酶学特性实验发现CBP1、CBP2与几丁质、胶状几丁质、脱氨再生几丁质三种类型的几丁质多糖有很强的特异性结合作用,且此结合作用是一个快速过程.通过对CBP2的凝集活性和相对分子质量分析表明:CBP2分子上含有两个或两个以上几丁质结合域(CBD).通过酶活性分析表明:CBP1和CBP2不仅具有溶菌酶活性,还具有几丁质酶活性,但不具有壳聚糖酶活性.两者是一种溶菌酶/几丁质酶双功能酶,但它们又有别于现已发现的溶菌酶/几丁质酶双功能酶,主要表现在CBP1、CBP2具有CBD结构.4.萝卜CBP1和CBP2的分子结构采用SDS-PAGE法和聚丙烯酰胺凝胶过滤法分别对萝卜CBP1、CBP2进行了相对分子质量的测定,结果表明:两者均为单体酶,且相对分子质量相近.通过对CBP1、CBP2进行了N-端序列测定,结果表明CBP2的N-端10个氨基酸序列为WDADMVAKVM,而CBP1由于N-端可能被封闭,无法得到其N-端氨基酸序列.进一步用CBP2的N-端氨基酸序列进行了BlastP搜索,结果在NCBI数据库中没有搜索到任何与其相匹配的有关几丁质结合蛋白的信息.
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