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目的：建立地稔药材的粉末显微鉴别、薄层色谱鉴别方法和桦木酸的含量测定方法，测定了浸出物和水分的含量;通过响应曲面法优化地稔药材中没食子酸、槲皮素、木犀草素及山柰素的提取条件，建立一测多评法测定地稔药材中没食子酸、槲皮素、木犀草素及山柰素的含量，并评价19批地稔的质量;采用MTT法探讨地稔不同提取部位的抗肿瘤作用，为地稔的质量标准提高和开发利用提供依据。
方法：①采用粉末显微鉴别法，观察地稔粉末的水装片、透化片，确定其显微特征;采用薄层色谱法，以硅胶G板为固定相，三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(5∶4∶1)为展开剂，没食子酸对照品、地稔对照药材为对照，喷以1％氯化铁乙醇溶液，置日光下检视，对19批药材进行薄层鉴别;参照2015年版的《中国药典》四部通则中的水分测定第二法（烘干法）、醇溶性浸出物热浸法，测定地稔药材水分以及70％乙醇浸出物含量。②采用HPLC，以依利特Hypersil ODS C18为色谱柱，流动相为乙腈(A)-0.1％磷酸水溶液(B)，梯度洗脱：0～15min，10～20％B，15～30min，20％B，30～33min，20～0％B，流速0.6mL/min，柱温25℃，检测波长210nm为色谱条件，测定不同产地的地稔桦木酸含量。③采用单因素试验、Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验以及Box-Behnken试验优化地稔中没食子酸、槲皮素、木犀草素以及山柰素的提取方法。采用HPLC，以AgilentZORBAX SB-C18为色谱柱，流动相为甲醇(A)-0.2％磷酸水溶液(B)，梯度洗脱：0～6min,83％B;6～10min,83～45％B;10～30min,45％B;30～32min,45～83％B;32～35min，83％B，流速1.0mL/min，柱温30℃，检测波长260nm为色谱条件，测定并计算（以没食子酸为内参物）槲皮素、木犀草素和山柰素的相对校正因子，进行了方法学验证，并比较了外标法与一测多评法定量的差异。采用聚类分析和主成分分析法分析不同产地的地稔药材质量。④采用MTT法，考察地稔的11个提取物对人卵巢癌细胞株SK-OV-3、人宫颈癌细胞株Hela、人肺癌细胞株A549、人白血病细胞株K562的细胞增殖抑制作用研究，并用HPLC法分析提取物，采用灰色关联度分析地稔提取物成分与肿瘤细胞抑制率的相关性。
结果：①不同产地地稔的粉末显微特征基本一致，多见非腺毛，石细胞有长方形、类圆形等不规则形状，长方形或类方形的木栓细胞碎片，栓内细胞单个脱落，淀粉粒多为单粒，草酸钙簇晶棱角较尖，气孔、纤维较少，螺纹导管多见;地稔供试品与没食子酸对照品、地稔对照药材色谱相应位置上显示相同颜色的斑点;不同产地的地稔药材水分含量范围为8.72～12.74％;70％乙醇浸出物含量范围为11.57～24.64％。②桦木酸进样量在0.0272～0.544μg范围内，线性关系良好，平均回收率为100.99％，RSD为1.2％，19批地稔药材中的桦木酸含量范围为0.0080～0.1000％，属福建宁德双溪镇产的最高，为0.1000％。③响应曲面法优选的提取条件以80％甲醇-27％硫酸(4∶1)[即甲醇-15％硫酸(16∶9)]为提取溶剂，回流提取206min;一测多评法测定没食子酸、槲皮素、木犀草素、山柰素的平均回收率及RSD分别99.06％，2.4％;99.70％，1.7％;85.65％，2.3％;97.79％，1.7％;与外标法结果无显著性差异，符合分析要求。聚类分析和主成分分析的结果一致，19个批次可分为3类，其中广东梅州南口镇、江西赣州关田镇、福建宁德双溪镇和广东长潭镇的综合得分最高，质量最好，贵州龙里云雾镇、贵州花溪青岩镇、贵州凯里永乐镇、贵州毕节何官屯镇的次之。④细胞增殖抑制实验结果表明地稔提取物S1、S4、S11对人卵巢癌细胞株SK-OV-3细胞有弱的抑制作用;S1、S4、S10、S11对人肺癌细胞A549细胞有微弱的抑制作用。其余样品对人宫颈癌细胞Hela、人白血病细胞K562皆无抑制或无明确的抑制作用。地稔提取物S1、84、S11色谱图上色谱峰较少，提示地稔中具抗肿瘤活性的成分紫外吸收较弱或无。经分析灰色关联度大于0.6的色谱峰有8个，分别是色谱峰9、4、11、2、12、13、1、3，其中，关联度大于0.8的是色谱峰9。
结论：建立的地稔薄层鉴别法和桦木酸的含量测定方法，专属性强、重复性好、结果准确可靠，方法简便可行;建立的一测多评法可对地稔中没食子酸、槲皮素、木犀草素、山柰素的含量进行测定，为地稔药材质量标准的提高和质量分析提供了方法;地稔部分提取物对人卵巢癌细胞株SK-OV-3细胞有抑制作用，提示地稔的水溶性成分对肿瘤细胞具选择性抑制作用，为地稔的抗肿瘤活性研究提供了基础。
方法：①采用粉末显微鉴别法，观察地稔粉末的水装片、透化片，确定其显微特征;采用薄层色谱法，以硅胶G板为固定相，三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(5∶4∶1)为展开剂，没食子酸对照品、地稔对照药材为对照，喷以1％氯化铁乙醇溶液，置日光下检视，对19批药材进行薄层鉴别;参照2015年版的《中国药典》四部通则中的水分测定第二法（烘干法）、醇溶性浸出物热浸法，测定地稔药材水分以及70％乙醇浸出物含量。②采用HPLC，以依利特Hypersil ODS C18为色谱柱，流动相为乙腈(A)-0.1％磷酸水溶液(B)，梯度洗脱：0～15min，10～20％B，15～30min，20％B，30～33min，20～0％B，流速0.6mL/min，柱温25℃，检测波长210nm为色谱条件，测定不同产地的地稔桦木酸含量。③采用单因素试验、Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验以及Box-Behnken试验优化地稔中没食子酸、槲皮素、木犀草素以及山柰素的提取方法。采用HPLC，以AgilentZORBAX SB-C18为色谱柱，流动相为甲醇(A)-0.2％磷酸水溶液(B)，梯度洗脱：0～6min,83％B;6～10min,83～45％B;10～30min,45％B;30～32min,45～83％B;32～35min，83％B，流速1.0mL/min，柱温30℃，检测波长260nm为色谱条件，测定并计算（以没食子酸为内参物）槲皮素、木犀草素和山柰素的相对校正因子，进行了方法学验证，并比较了外标法与一测多评法定量的差异。采用聚类分析和主成分分析法分析不同产地的地稔药材质量。④采用MTT法，考察地稔的11个提取物对人卵巢癌细胞株SK-OV-3、人宫颈癌细胞株Hela、人肺癌细胞株A549、人白血病细胞株K562的细胞增殖抑制作用研究，并用HPLC法分析提取物，采用灰色关联度分析地稔提取物成分与肿瘤细胞抑制率的相关性。
结果：①不同产地地稔的粉末显微特征基本一致，多见非腺毛，石细胞有长方形、类圆形等不规则形状，长方形或类方形的木栓细胞碎片，栓内细胞单个脱落，淀粉粒多为单粒，草酸钙簇晶棱角较尖，气孔、纤维较少，螺纹导管多见;地稔供试品与没食子酸对照品、地稔对照药材色谱相应位置上显示相同颜色的斑点;不同产地的地稔药材水分含量范围为8.72～12.74％;70％乙醇浸出物含量范围为11.57～24.64％。②桦木酸进样量在0.0272～0.544μg范围内，线性关系良好，平均回收率为100.99％，RSD为1.2％，19批地稔药材中的桦木酸含量范围为0.0080～0.1000％，属福建宁德双溪镇产的最高，为0.1000％。③响应曲面法优选的提取条件以80％甲醇-27％硫酸(4∶1)[即甲醇-15％硫酸(16∶9)]为提取溶剂，回流提取206min;一测多评法测定没食子酸、槲皮素、木犀草素、山柰素的平均回收率及RSD分别99.06％，2.4％;99.70％，1.7％;85.65％，2.3％;97.79％，1.7％;与外标法结果无显著性差异，符合分析要求。聚类分析和主成分分析的结果一致，19个批次可分为3类，其中广东梅州南口镇、江西赣州关田镇、福建宁德双溪镇和广东长潭镇的综合得分最高，质量最好，贵州龙里云雾镇、贵州花溪青岩镇、贵州凯里永乐镇、贵州毕节何官屯镇的次之。④细胞增殖抑制实验结果表明地稔提取物S1、S4、S11对人卵巢癌细胞株SK-OV-3细胞有弱的抑制作用;S1、S4、S10、S11对人肺癌细胞A549细胞有微弱的抑制作用。其余样品对人宫颈癌细胞Hela、人白血病细胞K562皆无抑制或无明确的抑制作用。地稔提取物S1、84、S11色谱图上色谱峰较少，提示地稔中具抗肿瘤活性的成分紫外吸收较弱或无。经分析灰色关联度大于0.6的色谱峰有8个，分别是色谱峰9、4、11、2、12、13、1、3，其中，关联度大于0.8的是色谱峰9。
结论：建立的地稔薄层鉴别法和桦木酸的含量测定方法，专属性强、重复性好、结果准确可靠，方法简便可行;建立的一测多评法可对地稔中没食子酸、槲皮素、木犀草素、山柰素的含量进行测定，为地稔药材质量标准的提高和质量分析提供了方法;地稔部分提取物对人卵巢癌细胞株SK-OV-3细胞有抑制作用，提示地稔的水溶性成分对肿瘤细胞具选择性抑制作用，为地稔的抗肿瘤活性研究提供了基础。