通过对良恶性多形性腺瘤临床标本中的细胞周期相关基因，细胞凋亡相关基因的表达和凋亡及DNA含量变化进行检测，并对AgNOR染色颗粒进行计数，旨在探讨这些因素在PA恶变和复发中的作用和意义，为临床研究和预后提供帮助和参考依据。1．良、恶性多形性腺癌中Cyclin D1和CDK4蛋白表达的变化和意义 Cyclin D1作为细胞周期的正性调控因子，通过与CDK4/CDK6结合并使之激活，使Rb发生磷酸化，E2F-1从Rb中解离出来，进一步激活一些基因的表达、启动DNA复制，推动细胞从G1期进入S期。用免疫组化检测良、恶性多形性腺瘤中Cyclin D1和CDK4蛋白的表达变化。结果显示，MPA组中，Cyclin D1和CDK4的表达均显著高于N组和PA组，PA组又显著高于N组。因此，在PA中，Cyclin D1和CDK4的表达在肿瘤细胞的细胞周期循环发生了障碍，Cyclin D1表达产物的堆积使肿瘤细胞的G1期缩短，引起 — ———g＆—— 了细胞的过度增殖。使 PA过度增殖甚至恶变。研究提示，Cyclin DI和 CDK4 参与了 PA和 MPA中的发生过程。CyClin DI和 CDK4免疫组化的染色和定 量分析为PA向MllA的转变研究提供了参考。 2·EZFq和PA恶变的关系 在细胞GI店期，转录因子EZF－l 能与编码细胞周期调节基因的启动子 结合，调控DNA的复制和细胞增殖。EZFI对细胞周期既可起促进作用，又、可起抑制作用。采用兔疫组化的方法观察了EZFI在良、恶性多形性腺瘤中 的定量表达。结果显示，MPA组中，EZF的表达显著高于PA组和N组。EZF－l 可能与一些靶基因如 CyClin DI、CyClin E、C－IyC等基因的启动子结合，激 活了这些与细胞周期相关的基因，进而调节细胞周期。因此EZF－l 在PA和 MPA的发生过程中，表现为对细胞周期的促进作用，而非抑制作用。 3．良、恶性多形性腺瘤中 pZ！一‘o”’转录水平的表达变化研究 pZIW‘门”’是 CKI家族的成员之一，通过抑制多种 CyClinjCDK复合物 的活性来调节细胞周期。本实验应用原位杂交的方法对 pZ！”’门”在良恶性 多形性腺瘤中的表达进行了研究。结果表明，pZI在 MPA的表达强度较 N 组和 PA中低o＜0．05卜 N中，pZIW’”m呈强阳性表达，有效的调节了细胞 周期的进程。PA中，pZI转录水平较高，通过结合并抑制 CDKs和 Cyclins 的活性来控制细胞周期GI期的进程。MPA中，pZI的表达发生了下调，这 可以是山于其基因发生突变、缺失等改变或开放表达的过程受阻所造成。研 究提示，PZI表达的减弱或消失可以造成对肿瘤细胞生长抑制作用的降低。 4．细胞凋亡相关基因 bclZ InRNA的变化及凋亡和良恶性多形性腺瘤的关系 凋亡是生理状态下的一种细胞死亡方式，在许多疾病中都表现出了异常 的病理性作用。本研究采用原位杂交的方法检测了与细胞凋亡调节密切相关 的基因－－－－nlZ在良恶性多形性腺瘤中的表达情况，并用IUNEL法对凋亡细 胞进行了染色。实验中观察到 PA及 MPA中均有 hcf｛ InRNA的表达，但 MPA 组b。12阳性表达明显高于PA组，而凋亡细胞却减少。提示bcIZ基因的高 3 务丛O门坠人井嗷／少人裕义 表达与MPA的发生有关，且bclZ的表达与凋亡指数呈明显的负相关。囚此 hcf－2的作用机理可能是比－2基因阻碍了PA中肿瘤细胞的凋亡，使肿瘤细 胞生存期延长，肿瘤细胞过度增殖，最终恶变。 5．PA及复发病例中 AgNOR和 DNA含量的定量分析及意义 DNA含量可以反映细胞在恶变过程中，细胞的增殖程度和染色体的畸变 程度。AgNOR是 DNA转录的调节者，它的变化反映细胞诱导分化的能力及 d1NA的转录活性。本研究对PA及复发病例中肿瘤细胞作了AgNOR银染计 数和DNA含量测定，并分析了二者之间的关系以及对PA的预后价值。结果 表明，正常腺上皮和腺管上皮细胞，软骨细胞的 DI（DNA Index）值具有显 著性差异，而腺管上皮细胞和粘液样细胞之间的DI值无显著性差异。DNA 含量的高低与细胞的类型密切相关。在复发的病例中，部分细胞核中的DNA 含量非常高，PA和复发组之间有了显著性差异。AgNOR计数与 DNA含量 呈明显的正相关。因此，可以认为 PA中的 AgNOR数量在一定程度卜也反映 了肿瘤细胞的增殖活性。PA中的 DNA含量和 AgNOR数量均可作为估价 PA 增殖状态和预后的参考指标。