大豆淀粉微载体的制备及在细胞培养中的初步应用

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淀粉微球在药物缓释、包埋剂和吸附剂方面的应用已有很多报道,但在贴壁动物细胞培养方面的应用却鲜有研究报道。用淀粉制备细胞培养用微载体,具有其独特的优势。本研究以价廉易得的淀粉为原料,研究制备适合动物细胞贴壁培养用的微载体,旨在开发具有高附加值、可生物降解、可用淀粉酶消化以收获细胞、非动物来源材料制备的淀粉微载体,避免在生物制药领域使用动物源性材料和高成本微载体的弊端。本文探讨了微载体的研究进展、高分子微球的基本性质、淀粉微球的制备方法及其研究应用进展。论证了淀粉微球作为动物细胞培养用微载体的可行性。在前人制备淀粉微球的基础上,经过制备工艺改进和参数优化,探讨了制备淀粉微球的最佳工艺条件。结果表明:以机油和异辛烷为油相,6%糊化淀粉碱溶液为水相,聚乙二醇二缩水甘油醚为交联剂制备交联淀粉微球时,油水相体积比4:1,搅拌转速500 rpm,交联剂10%为制备交联淀粉微球的最佳工艺条件,制备的交联淀粉微球能够耐受121℃C 30min的高压灭菌。通过正交试验、配基筛选,在淀粉微球表面偶联了二乙氨基乙基(DEAE),使淀粉微球表面具有了和商品化Cytodex 1微载体近似的电荷和电荷量。在测定、分析了所制交联淀粉微球的基本理化性质后,本研究以BHK-21、Marc-145和MDCK三种疫苗生产常用贴壁细胞为实验细胞,以Cytodex 1微载体为对照,进行的微载体细胞培养,并对实验结果进行了总结分析。研究结果表明:所制备的淀粉微球,在偶联DEAE后,能够耐受高压灭菌。在细胞培养后,偶联了 DEAE、粒径与Cytodex 1微载体相近的淀粉微球,上述三种细胞均能够良好贴附、增殖。在相同悬浮培养条件下,淀粉微载体的细胞贴附、增殖量与Cytodex 1微载体近似,培养至144h,上述三种细胞的增殖量均达到最大值。其中,在自制淀粉微球上BHK-21细胞的最大增殖量为 2.5 ×106cells/mL,略大于 Cytodex 1 的 2.2 ×106cells/mL。Marc-145 细胞的最大增殖量为前者1.4×106cells/mL,后者1.6×106cells/mL,后者略大于前者;MDCK细胞的最大增殖量为前者2.2×106cells/mL,后者2.4×106cells/mL,后者略大于前者。用自制微载体培养细胞,三种贴壁细胞的生长与生化代谢曲线也和商品化的Cytodex 1相似。综上可知,本研究制备的淀粉微球,通过偶联DEAE后,能够用于BHK-21、Marc-145和MDCK贴壁细胞的微载体悬浮培养。其细胞培养效果与Cytodex 1相似,有良好的开发与应用前景。
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