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第一部分GRHL1、GRHL2在非小细胞肺癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系目的:研究GRHL1、GRHL2在NSCLC组织中的表达水平及其与临床病理特征的关系。方法:通过免疫组织化学方法检测GRHL1、GRHL2在37例肺鳞癌、48例肺腺癌组织以及所对应癌旁肺组织中的表达情况,并收集临床病理资料,分析GRHL1、GRHL2的表达与临床病理特征的关系。实验结果采用SPSS 19.0统计软件进行分析。结果:1、肺癌组织中GRHL1的阳性表达率明显低于癌旁肺组织,GRHL1在肺鳞癌组织与癌旁肺组织中的阳性表达率分别为32.43%(12/37)、81.08%(30/37),GRHL1在肺腺癌组织与癌旁肺组织中的阳性表达率分别为31.25%(15/48)、83.33%(40/48)。肺癌组织中GRHL2的阳性表达率明显高于癌旁肺组织,GRHL2在肺鳞癌组织与癌旁肺组织中的阳性表达率分别为81.08%(30/37)、10.81%(4/37),GRHL2在肺腺癌组织与癌旁肺组织中的阳性表达率分别为75.00%(36/48)、12.50%(6/48)。2、GRHL1、GRHL2在肺癌中的表达程度与肿瘤的组织分化程度、临床TNM分期以及有无淋巴结转移相关,而与患者年龄、性别、肿瘤病理类型无关。结论:GRHL1在NSCLC组织中低表达,GRHL2在NSCLC组织中高表达。GRHL1、GRHL2在肺癌中的表达程度与肺癌的组织分化程度、临床TNM分期和有无淋巴结转移相关。第二部分GRHL1对肺腺癌A549细胞生物学行为的影响目的:探讨GRHL1过表达后对A549细胞增殖、周期、迁移、克隆能力的影响。方法:体外构建GRHL1基因表达质粒p ENTER-Flag-GRHL1,采用脂质体法将重组真核表达质粒转染至低表达GRHL1的A549细胞系,构建过表达GRHL1的A549细胞系,通过q PCR、Western blot鉴定表达产物。采用结晶紫细胞染色实验、流式细胞术、细胞划痕实验、细胞克隆实验,观察过表达GRHL1后对A549细胞增殖、周期、迁移、克隆能力的影响。结果:1、将成功构建的p ENTER-Flag-GRHL1表达质粒转染A549细胞,经q PCR、Western blot鉴定显示GRHL1过表达效果明显,由此可见构建的GRHL1过表达A549细胞系A549-GRHL1(+)达到实验预期目标,可作为本实验理想的细胞系。2、结晶紫细胞染色结果显示与空载质粒VECTOR组相比,过表达GRHL1对A549细胞的增殖起到抑制作用;流式细胞术检测细胞周期发现A549-GRHL1(+)组细胞周期被阻滞在G0/G1期;划痕实验结果显示与空载质粒VECTOR组相比,过表达GRHL1极大地抑制了A549细胞的迁移能力;细胞克隆实验显示与空载质粒VECTOR组相比,过表达GRHL1能明显抑制A549细胞的克隆能力。结论:GRHL1能明显抑制肺腺癌A549细胞的增殖、迁移和克隆能力,并能抑制细胞周期进程,使细胞周期被阻滞在G0/G1期。