柯萨奇病毒B3感染HeLa细胞后mTOR及下游信号蛋白表达的变化

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目的:通过柯萨奇病毒B3(CVB3)感染体外培养的HeLa细胞,观察mTOR信号通路及下游信号分子mTOR. p-mTOR、p70S6K、p-p70S6K、4EBP1、p-4EBP1表达或活性的变化。方法:以CVB3感染HeLa细胞后3、6、9、12、24h作为病毒组,以未被CVB3感染的同一时间点细胞作为对照组;运用Western Blot检测mTOR、p-mTOR、p70S6K、p-p70S6K、4EBP1、p-4EBP1表达的变化;免疫荧光检测mTOR信号通路下游分子4EBP1在细胞的定位。结果:1、CVB3感染HeLa细胞后,不同时间点感染后mTOR、p-mTOR、 p70S6K、p-p70S6K、4EBP1、p-4EBP1表达含量变化及与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05):①病毒组mTOR及p-mTOR的表达低于同时间点对照组(P<0.05),且随时间延长蛋白表达逐渐降低,对照组随时间延长蛋白表达逐渐增加;②病毒组p70S6K及p-p70S6K表达低于同时间点对照组(P<0.05),且随时间延长蛋白逐渐表达降低,对照组蛋白表达随时间延长逐渐增加;③病毒组4EBP1、p-4EBP1蛋白表达均高于同时间点对照组(P<0.05)。对照组4EBP1及p-4EBP1在9h时间点表达最低。病毒组4EBP1及p-4EBP1随时间延长蛋白表达逐渐升高。2、通过直线相关分析发现病毒组mTOR与p70S6K蛋白表达之间具有正相关关系,对照组间无相关关系;病毒组mTOR与4EBP1蛋白表达之间具有负相关关系,而二者在对照组具有正相关关系;mTOR与p-mTOR两组间均具有正相关关系,p70S6K与p-p70S6K蛋白表达病毒组具有正相关关系,对照组无相关关系。病毒组4EBP1与p-4EBP1蛋白表达无明显相关,对照组具有正相关关系。3.免疫荧光检测4EBP1在不同时间点对照组以细胞质表达为主,病毒组在胞质胞核中均有表达,病毒组表达水平较对照组高。4EBP1在病毒组12小时后细胞核表达逐渐增强。结论:1、CVB3感染HeLa细胞后可抑制mTOR/p70S6K通路,激活mTOR/4EBP1通路。2、CVB3可能作为负调控生长因子促进4EBP1在细胞的表达。
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