调控细胞核及着丝粒蛋白质-蛋白质相互作用的动力学研究

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本文对调控细胞核及着丝粒蛋白质-蛋白质相互作用进行了动力学研究。为了阐明Zwint-1与ZW10在动点上的天然相互作用和它们在纺锤体检查点信号转导中的作用,本文首先用生化方法证实Zwint-1与ZW10的N端80个氨基酸存在相互作用。在HeLa细胞中表达ZW10的突变体显示ZW10定位于动点,说明与Zwint-1的相互作用区域就可以将ZW10定位在动点上。其次RNA干扰结果显示抑制Zwint-1的合成干扰了ZW10的动点定位,表明Zwint-1将ZW10定位于动点。同时,Zwint-1的表达被抑制后并不引起细胞停留在有丝分裂期,而是引起了早熟染色体分离。本研究证明Zwint-1在动点的动态性组装过程中起着关键的作用。抑制Zwint-1干扰了ZW10,CENP-F和dynamitin定位于动点,中止了nocodazole引起的有丝分裂期停留,同时诱导了带有染色体桥的细胞早熟地从后期走出有丝分裂,从而产生了带有异倍体核的子代细胞。由于Zwint-1和ZW10在酵母中是不保守的,只在后生动物中才存在,因此,本研究成功地说明后生动物中进化出了一套更为精细的纺锤体检查点机制,从而保证有丝分裂染色体分离的精确性。
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