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目的通过构建牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)和流感病毒(influenza A,H1N1)共感染大鼠动物模型,深入研究细菌和病毒感染之间的联系,探讨P.gingivalis和H1N1共感染对大鼠牙周炎症反应的影响及其作用机制,为牙周炎和呼吸系统疾病的预防与临床治疗提供理论基础。方法1.将50只SD大鼠按照数字随机法分为5组(对照组、P.gingivalis组、H1N1组、P.gingivalis+H1N1组、P.gingivalis+H1N1+TAK-242组),对照组单纯采用牙颈部丝线结扎;P.gingivalis组采用牙颈部丝线结扎后牙周涂抹P.gingivalis;H1N1组采用牙颈部丝线结扎后予以H1N1滴鼻;P.gingivalis+H1N1组在牙颈部丝线结扎后予以牙周涂抹P.gingivalis和H1N1滴鼻;P.gingivalis+H1N1+TAK-242组在牙颈部丝线结扎及牙周涂抹P.gingivalis和H1N1滴鼻后,尾静脉注射TAK-242(3 mg/kg)。2.各组大鼠在处理4周后大体观察大鼠牙周改变;采集大鼠外周血和牙周组织,采用HE染色分析各组大鼠牙周组织和肺组织病理学改变;采用牙周探诊深度(probing depth,PD)、菌斑指数(plaque index,PLI)、龈沟出血指数(sulcus bleeding index,SBI)评估牙周病变程度;酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和RT-PCR检测外周血和牙周组织TNF-α、IL-6、IL-1β和MMP-8表达水平;RT-PCR和Western blot检测牙周组织TLR4、NF-κB、My D88 m RNA和蛋白的表达水平。3.在大鼠共感染P.gingivalis和H1N1后,使用TAK-242阻断TLR4/NF-κB信号通路,进一步采用PD、PLI、SBI和MOB值评估牙周病变程度;RT-PCR检测牙周组织TNF-α、IL-6、IL-1β和MMP-8表达水平;RT-PCR和Western blot检测牙周组织TLR4、NF-κB、My D88 m RNA和蛋白的表达水平。结果1.大鼠感染P.gingivalis或H1N1后,大体观察牙龈病变程度明显高于对照组,P.gingivalis+H1N1组大鼠较H1N1组和P.gingivalis组饮食饮水更差,有明显的牙龈炎症,可见深牙周袋,探针出血且高出牙龈沟,有明显的附着丧失。2.牙周组织和肺组织HE染色显示大鼠感染P.gingivalis或H1N1后牙周组织和肺组织损伤明显高于对照组,P.gingivalis+H1N1组大鼠牙周组织和肺组织炎症浸润明显高于H1N1组和P.gingivalis组。3.P.gingivalis组和H1N1组中PD、PLI、SBI和MOB值均明显高于对照组(P<0.05)。在P.gingivalis+H1N1组中PD、PLI、SBI和MOB值均高于P.gingivalis组或H1N1组(P<0.05)。4.P.gingivalis组和H1N1组中外周血和牙周组织炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β和MMP-8的表达水平均明显高于对照组(P<0.05)。P.gingivalis+H1N1组中外周血中炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β和MMP-8的表达水平均高于P.gingivalis组或H1N1组(P<0.05)。5.P.gingivalis组和H1N1组中牙周组织中TLR4、NF-κB和My D88 m RNA和蛋白的表达水平均明显高于对照组(P<0.05)。在P.gingivalis+H1N1组中牙周组织中TLR4、NF-κB和My D88 m RNA和蛋白的表达水平均高于P.gingivalis组或H1N1组(P<0.05)。6.TAK-242阻断TLR4/NF-κB信号通路后能够反转P.gingivalis和H1N1共感染对牙周损伤和炎症反应的影响(P>0.05)。结论P.gingivalis和H1N1共感染能明显增加大鼠牙周炎症反应,促进炎症因子的产生,其作用机制可能与激活TLR4/NF-κB信号通路有关。