目的 通过比较不同剂量腺嘌呤所建立的肾损伤型肾阳虚证大鼠模型,观察不同剂量腺嘌呤对大鼠肾损伤及肾阳虚证各项指标的影响,明确不同剂量腺嘌呤造模对肾脏的损伤程度,优化出能够诱导肾损伤程度适中并能维持模型稳定性的肾阳虚证模型的腺嘌呤剂量,并完善评价肾损伤型肾阳虚模型的指标体系,为进一步研究肾阳虚证奠定基础。方法 将166只雄性SD大鼠按体重随机分成4组,即正常对照组(n=19)、腺嘌呤100mg/kg模型组(n=49)、腺嘌呤150mg/kg模型组(n=49)、腺嘌呤200mg/kg 模型组(n=49),分别采用 100mg/kg、150mg/kg、200mg/kg 腺嘌呤悬浊液灌胃,1次/d,连续14天,记录动物的一般症状体征(体重、体温、抓力、摄食、饮水、尿量、竖毛、拱背、蜷缩及抓取激惹反应),第7、14天取血、尿样,检测血清ACTH、CORT、BUN、Scr和尿液17-OHCS、U-TP含量,并每组随机处死3只大鼠,取肾脏进行HE及Masson染色,造模第14天通过大鼠一般症状体征、生化指标及肾脏损伤程度判断各模型是否成功;造模成功后,按大鼠模型状态将各剂量模型组分为各剂量腺嘌呤模型(自然恢复)组、各剂量腺嘌呤(肾气丸)组、各剂量腺嘌呤模型(持续)组、各剂量腺嘌呤(持续+肾气丸)组,正常组和各剂量腺嘌呤模型(持续)组每组13只,其余每组10只,给予肾气丸验证各模型,连续给药21天,记录动物的一般症状体征(体重、体温、抓力、饮食、饮水、尿量、竖毛、拱背、蜷缩及抓取激惹反应);给药后第7天随机取正常组和各剂量腺嘌呤模型(持续)组3只大鼠肾脏进行HE及Masson染色继续观察肾脏损伤程度,并每隔7天取血、尿样,检测ACTH、CORT、BUN、Scr、U-TP及17-OHCS含量。处死动物前收集尿液,检测U-TP、17-OHCS含量,给予肾气丸第22天,麻醉大鼠,心脏取血,分离制备血清,检测ACTH、CORT、BUN、Scr含量;取下丘脑制备匀浆,检测CRH含量;取肾脏组织进行HE和Masson染色,200倍光镜下观察肾脏组织病理变化以及纤维化损伤程度来明确肾损伤程度。结果(1)在一般症状体征方面,大鼠经不同剂量腺嘌呤造模后,表现为动物不同程度的体重下降,饮水量和尿量增多,体温、抓力降低,竖毛、拱背和蜷缩现象明显,激惹反应能力减弱。(2)在下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴方面,不同剂量腺嘌呤造模后,各剂量腺嘌呤组大鼠的HPA轴相关指标ACTH、CORT、17-OHCS含量有不同程度的下降。(3)在肾功能方面,不同剂量腺嘌呤造模后血清BUN、Scr含量有不同程度的升高,并随着造模时间的增加呈进行性升高。(4)在肾组织病理学HE及Masson染色方面观察显示,不同剂量腺嘌呤造模后,肾小球坍塌、肾小管扩张,肾小管内有褐色针状物沉淀,肾间质产生纤维化,随着造模时间增加,上述肾脏损伤情况逐渐加重。(5)给予肾气丸干预后,肾气丸能不同程度的改善各剂量腺嘌呤组大鼠的一般症状体征、肾功能及HPA轴相关指标,改善肾脏的损伤程度。结论(1)造模阶段,腺嘌呤剂量100mg/kg、150mg/kg、200mg/kg在造模第14能成功制备肾损伤程度不同的肾阳虚证模型。(2)肾气丸干预阶段,肾气丸能在一定程度上改善腺嘌呤对大鼠肾脏的损伤。从诱导肾损伤型肾阳虚证模型的稳定性上来看,腺嘌呤剂量150mg/kg对肾脏的损伤达中度,并且造模14天后持续给予相同剂量腺嘌呤21天能很好的维持肾损伤型肾阳虚证模型,在此剂量下肾气丸的作用明显,适合课题组下一步继续研究肾阳虚证的造模剂量。(3)通过对大鼠的一般症状体征、肾功能、肾阳虚特异性指标的检测,并结合Masson染色对肾损伤程度进行判断,完善评价肾损伤型肾阳虚证模型的指标体系,为课题组进一步研究“肾主水”分子机制奠定基础。