DNA损伤是细胞生命中的常见现象。各种各样的环境因素均可持续损害细胞内的遗传物质。这些因素包括来自太阳光的紫外线、电离辐射等外源因素，和来自体内物质代谢的氧化剂等内源因素。在长期的进化过程中，针对各种代谢和外界来源的DNA损伤的因素，地球上的生物逐渐发展出一套完整的修复DNA损伤的机制，那就是高度保守的DNA损伤检控点和DNA修复。　　DNA损伤检控点是指当DNA损伤时，延迟或阻滞细胞周期的生化过程。当DNA损伤时，该检控点途径的激活，能防止损伤的或复制不完全的遗传物质的传播，给细胞以足够的时间在细胞周期重新开始前，修复DNA损伤;或损伤过大时，启动凋亡或细胞衰老程序。DNA损伤检控点途径的缺陷，可引起突变的传播，导致其在体内的积累。而突变在体内的积累目前被认为可能是肿瘤发生最主要的原因。因此，DNA损伤时，DNA损伤检控点途径的激活，是维持遗传物质（染色体）的稳定性、抑制肿瘤发生所必需的。　　Rad9-Rad1-Hus1(9-1-1)复合体是DNA损伤检控点途径中重要的感受器，DNA损伤时，该复合体在RFC-Rad17的帮助下，与损伤的DNA结合，然后激活DNA损伤检控点途径，并启动DNA修复的过程。故9-1-1复合体在DNA损伤检控点途径和DNA修复中发挥重要的作用。　　Jab1(Jun activating binding protein，Jab1)是COP9信号蛋白复合物(COP9signalosome，CSN)中的一个亚基，存在于几乎所有真核生物中。大量的研究表明:在哺乳动物细胞，Jab1作为单体或COP9信号体第5个亚基(CSN5)，参与p53、p27、Smad4、Smad7、cyclin E以及雌激素受体等人体内许多蛋白质的降解，介导了细胞增殖、分化以及肿瘤发生的过程。尽管其明确的作用机制还有待阐明，但已有大量的研究提示，Jab1的作用与泛素依赖的蛋白酶体介导的降解有关。　　本实验室在前期的研究中，用Jab1作诱饵，对人类乳腺癌cDNA文库筛选时发现，Hus1与Jab1有相互作用;同时免疫组化结果显示Jab1在胰腺癌组织高表达。尽管目前诸多研究显示Jab1涉及多种蛋白质的代谢，如:转录因子(Smad4，Smad7，Cdc)、调节细胞周期的各种因子(p27，C-Jun，p53and cyclin E)以及激素受体等与肿瘤发生有关的因子，并被认为可能是一个新的侯选癌基因。然而Jab1对9-1-1复合物的影响在国内外未见文献报道。本研究旨在明确DNA损伤时，Jab1对9-1-1的调节作用及其可能的作用机制，以及Jab1对DNA损伤检控点途径的影响，为进一步明确Jab1与9-1-1相互作用的关系，深入探讨Jab1的功能奠定理论基础，同时为揭示DNA损伤时肿瘤发生的机理提供理论依据。　　目的:　　探讨DNA损伤时，Jab1对9-1-1的调节作用及其机制。　　方法:　　1)通过正向和反向免疫共沉淀技术明确Jab1与9-1-1的相互作用;　　2)利用GST蛋白质in vitro pull-down技术确定9-1-1中与Jab1直接作用的成分;　　3)利用真核表达技术，观察Jab1高表达(overexpres sion)对细胞内9-1-1的影响;　　Jab1过表达对293T细胞中外源性9-1-1的影响;　　Jab1过表达对Panc1细胞中内源性9-1-1的影响;　　4)利用RNA干扰技术，观察Jab1表达降低(knockdown)对细胞内9-1-1的影响。　　5)利用突变检测技术，观察Jab1过表达对细胞中HPRT基因突变的影响。　　6)建立DNA损伤模型，观察DNA损伤对Jab1与9-1-1相互作用的影响。　　7)观察UV造成的DNA损伤对Jab1介导的9-1-1调节的影响。　　UV造成的DNA损伤对293T细胞中Jab1介导的外源性9-1-1调节的影响。　　UV造成的DNA损伤对Panc1细胞中Jab1介导的内源性9-1-1调节的影响。　　8)观察HU造成的DNA损伤对Jab1介导的9-1-1调节的影响。　　HU造成的DNA损伤对293T细胞中Jab1介导的外源性9-1-1调节的影响。　　HU造成的DNA损伤对Panc1细胞中Jab1介导的内源性9-1-1调节的影响。　　9)利用蛋白质合成酶的抑制剂环己酰亚胺(CYH)，阻断9-1-1的合成，观察Jab1过表达对细胞中9-1-1稳定性的影响。　　10)利用蛋白酶体的抑制剂MG132，阻断26S的蛋白酶体介导的蛋白质降解，观察Jab1过表达对细胞内9-1-1水平的影响。　　结果:　　1)正向和反向免疫共沉淀分别验证了细胞内源性的Rad1、Hus1、Rad9与Jab1确有较强的相互作用，充分证实了酵母双杂交的结果，为进一步研究Rad9-Rad1-Hus1和Jab1的功能提供了理论依据。　　2)利用GST蛋白质in vitro pull-down技术初步明确了9-1-1中与Jab1直接作用的亚基是Rad1;　　3)在正常细胞和肿瘤细胞中，过表达的Jab1既能明显降低外源性表达的9-1-1在细胞内的水平，同时也明显降低细胞内源性9-1-1的水平。　　4)利用RNA干扰技术降低细胞内Jab1的表达水平，则细胞中9-1-1的水平均有不同程度的升高，从另一方面证实Jab1确有降低细胞内9-1-1的作用。　　5)采用HPRT基因突变技术初步证实，过表达的Jab1在降低细胞中9-1-1水平的同时，增高了细胞内基因突变的发生率。　　6)我们首先建立了DNA损伤模型，然后采用免疫共沉淀方法明确了Rad1、Hus1、Rad9确实与Jab1有相互作用，且DNA损伤能增强这种相互作用。　　7)采用Western Blot技术在293T和Panc1两种细胞中分别检测UV介导的DNA损伤时，Jab1对细胞中9-1-1水平的影响，明确了UV型DNA损伤能增强Jab1对细胞中9-1-1的下调作用。　　8)通过观察293T和Panc1细胞中，HU型DNA损伤对细胞中Jab1介导的9-1-1下调作用的影响，进一步证实了DNA损伤确能增强Jab1对细胞中9-1-1的这种调节作用。　　9)利用蛋白质合成酶的抑制剂CYH，阻断9-1-1的合成后，细胞中9-1-1的稳定性显著降低，结果提示:Jab1主要通过降解细胞中的9-1-1，影响了细胞内9-1-1的水平。　　10)利用26S蛋白酶体的抑制剂MG132，我们基本证实:Jab1降解9-1-1是通过26S蛋白酶体实现的。　　结论:　　1)Jab1确实与9-1-1复合物有相互作用，且DNA损伤能增强二者的相互作用。　　2)过表达的Jab1能显著降低293T和Panc1细胞中9-1-1的水平，在DNA损伤时该作用尤为明显。　　3)siJab1能有效地降低细胞中Jab1的表达水平，进而增加细胞中9-1-1的水平。　　4)过表达的Jab1在降低细胞中9-1-1水平的同时，增加了细胞中HPRT基因突变的发生率。　　5)Jab1调节细胞中9-1-1的水平是通过降解9-1-1实现的。　　6)Jab1降解9-1-1与ubiquitin-介导的26S蛋白酶体有关。