家畜遗传资源是生物多样性重要组成部分,对当今和将来人类的生存和农业生产具有重要的经济、科学及文化价值。但是随着高产专门化、杂种改良和生存环境的恶化,畜禽遗传资源多样性丧失程度日益加剧。为了进一步研究体细胞经超低温保存其生物学特征变化,及探索体细胞系在动物遗传资源保存中的应用,本研究以松辽黑猪和豫西脂尾羊这两种重要的家畜为研究对象,应用组织直接培养法,成功构建了两个畜种的体细胞系。通过系统研究所建细胞系的生物学特性,以期为日后的体细胞克隆、结构基因组、功能基因组等研究提供实验材料和数据。 1.试验采用组织块贴壁培养法,对松辽黑猪和豫西脂尾羊耳缘组织进行原代和传代培养,成功建立了耳缘组织成纤维细胞系,细胞生长动态学观察表明,这两畜种细胞的倍增时间分别为35.4h和41.5h,并且细胞经5次传代后形态无显著差异。试验对新建立的细胞系冷冻保存了一定数量的细胞,冻存前和复苏后细胞活率检测结果活率均在89%以上。 2.试验中对培养细胞进行形态学观察,核型和同工酶分析,以及GFP在培养细胞中表达的观察。结果表明松辽黑猪耳缘组织成纤维细胞染色体数2n=38的占92%,豫西脂尾羊细胞2n=54占89.5%;乳酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶同工酶电泳图谱正常,没有交叉污染;细菌、真菌、支原体检测呈阴性;松黑猪细胞转染绿色荧光蛋白质粒的效率高达37%。 这两种细胞系的建立,使松辽黑猪和豫西脂尾羊这两种国家重要遗传资源在细胞水平上得以保存下来,也为进一步基因组和体细胞克隆等研究提供了理想的生物材料。