禽传染性支气管炎（Avian Infectious Bronchitis,IB）是由禽传染性支气管炎病毒（Avian Infectious Bronchitis Virus IBV）引起鸡的一种急性、高度接触性的传染病。核蛋白（N蛋白）是IBV病毒内部核衣壳的组成蛋白,在细胞免疫和体液免疫中起重要作用。减毒沙门氏菌X4550株是目前常用的口服疫苗载体细菌,能携带可致免疫反应的异源抗原进入动物细胞内进行转录并最后表达出编码的外源抗原。因其染色体中cya和crp毒力基因被删除,且使用非抗性筛选宿主-载体平衡致死系统,疫苗株有可靠的安全性。本实验根据禽传染性支气管炎病毒（IBV）的四川分离株SAIBk株的全基因组序列（序列登录号为:DQ288927）设计一对特异性引物,利用RT-PCR技术从SAIBk基因组中扩增出N基因。将N基因插入质粒表达载体PYA3342的多克隆位点,经鉴定成功构建了重组表达质粒PYA3342-N。将此重组质粒转化入减毒鼠伤寒沙门氏菌X4550中,成功构建禽传染性支气管炎病毒N基因减毒沙门氏菌X4550疫苗。构建携带荧光GFP报告基因的重组减毒沙门氏菌X4550（PYA3342-GFP）,将该重组减毒沙门氏菌口服饲喂鸡。饲喂后取材制作组织冰冻切片,通过荧光显微镜观察重组减毒沙门氏菌在鸡体内分布规律。表明重组减毒沙门氏菌进入鸡体后能够在小肠,肝脏,脾脏,肾脏,肺脏和心脏成功定植。雏鸡口服1×10⁹CFU,5×10⁹CFU,1×10¹⁰CFU不同剂量减毒沙门氏菌疫苗X4550（PYA3342-N）,无不良反应和眼观病变。表明重组疫苗具有良好的安全性。免疫后6周用菌落PCR方法可从免疫鸡肺和肾脏组织匀浆中扩增出N基因,表明重组菌能够在体内稳定存在。免疫后两周血清中可以检测到特异性IgG,与PVAX1-N疫苗组比较差异显著（P＜0.05）。同时可在鸡肠道检测到粘膜抗体IgA的分泌,且疫苗组X4550（PYA3342-N）粘膜抗体水平显著高于PVAX1-N疫苗组,且差异极显著（P＜0.01）。疫苗组X4550（PYA3342-N）产生的外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群数量均高于PVAX1-N疫苗组和H120弱毒苗组,差异显著（P＜0.05）。X4550（PYA3342-N）疫苗组,H120弱毒苗组,PVAX1-N疫苗组对强毒的攻击保护率分别为73%,80%和67%。本研究为进一步研制IBV重组减毒沙门氏菌疫苗提供了基础材料。