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[目的]
本实验使用Notch通路阻断剂DAPT以阻断Notch-Runx1信号传导通路,观察其对血管内皮生长因子(VEGF)作用下大鼠间充质干细胞(BMSCs)增殖及Notch-Runx1通路相关基因mRNA的影响,研究Notch-Runx1信号传导通路在VEGF促进大鼠间充质干细胞增殖中的作用。
[方法]
(1)体外培养大鼠间充质干细胞,取对数生长期的细胞用于实验研究。
(2)实验分为4组,分别为对照组,VEFG组,DAPT组,两药组(VEGF+DAPT)。
(3)显微镜下(100×)观察各实验组细胞形态学变化。
(4)应用CCK-8法检测各实验组大鼠间充质干细胞增殖情况。
(5)应用RT-PCR法分别检测各实验组Notch-Runx1通路相关基因(Notch1、Notch2、Flk-1、HES-1、RUNX-1)mRNA水平的变化。
[结果]
(1)各实验组在培养72h后,与对照组相比,VEGF组细胞数目明显增多,形态活性较好,而DAPT组和两药组细胞形态变圆脱落,数目明显减少。
(2)各时间点(24h,48h,72h) VEGF组存活率均最高,而DAPT组及两药组存活率均较低,差异具有统计学意义(P<0.01),提示VEGF对BMSCs有明显的促进作用,而这种促进作用可被DAPT所抑制。
(3)与对照组相比,VEGF组的Notch1、Notch2和Flk-1基因的表达水平均有上调,差异均具有统计学意义(P<0.05)。而DAPT组及两药组Notch1和Notch2的表达水平稍下调,差异无统计学意义(P>0.05)。DAPT组及两药组的Flk-1基因表达水平稍有下调,但差异无统计学意义(P>0.05)。
(4) HES-1在VEGF组其表达水平下调,在DAPT与两药组中其表达水平上调,差异均有统计学意义(P<0.05)。
(5) RUNX-1基因的表达水平在VEGF组有所降低,而在两药组有所提高,差异有统计学意义(P<0.05),DAPT组的RUNX-1基因表达水平稍有增高,但差异无统计学意义(P>0.05)。
[结论]
本实验通过使用DAPT阻断Notch通路并检测VEGF对大鼠骨髓间充质干细胞增殖作用以及Notch-Runx1信号通路相关基因mRNA表达水平的影响,推测VEGF促大鼠间充质干细胞增殖的作用很可能是通过Notch-Runx1信号通路来实现的。