【摘 要】
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目的:通过内毒素诱导的葡萄膜炎大鼠模型,探究脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）预处理减轻EIU大鼠眼部炎症过程中mi R-146a和其作用靶点IRAK1、TRAF6及NF-κB P65的表达变化。方法:SPF级Wistar大鼠随机分3组:正常组（normal control,NC）,内毒素耐受组（endotoxin tolerance,ET）,内毒素诱导的葡萄膜炎组（EIU）,
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目的:通过内毒素诱导的葡萄膜炎大鼠模型,探究脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）预处理减轻EIU大鼠眼部炎症过程中mi R-146a和其作用靶点IRAK1、TRAF6及NF-κB P65的表达变化。方法:SPF级Wistar大鼠随机分3组:正常组（normal control,NC）,内毒素耐受组（endotoxin tolerance,ET）,内毒素诱导的葡萄膜炎组（EIU）,每组15只。通过连续5日每日给予ET组大鼠0.1mg/Kg LPS诱导内毒素耐受状态,正常组和EIU组大鼠接受等量无菌生理盐水作为对照;第6日,ET组大鼠和EIU组大鼠皮下注射300ug LPS诱导眼部炎症,正常组再次接受等量无菌生理盐水处理,给药部位均为右后足。24小时后,于裂隙灯下观察各组大鼠眼前节炎症反应,并进行临床表现及组织病理学评分,通过ELISA法检测房水内TNF-a和IL-6的浓度,RT-PCR和Western Blot定量检测虹膜睫状体内mi R-146a、IRAK1和TRAF6 m RNA和蛋白的相对表达量以及免疫荧光技术检测虹膜睫状体内NF-κB P65的活化程度。结果:裂隙灯下可见EIU大鼠虹膜血管显著扩张、前房内纤维素渗出及虹膜后粘连,组织病理学切片证实前房及虹膜睫状体内大量炎性细胞浸润,虹膜睫状体水肿,而ET大鼠临床体征和组织病理学表现均较EIU大鼠减轻,正常大鼠未见明显的葡萄膜炎表现。ELISA法检测房水TNF-a及IL-6水平,正常大鼠房水中TNF-a和IL-6的平均浓度为64.09pg/ml和40.42pg/ml,EIU大鼠房水TNF-a和IL-6的平均含量为428.60pg/ml和107.90pg/ml,ET大鼠房水TNF-a和IL-6的平均含量为289.70pg/ml和65.33pg/ml。RT-PCR结果示,EIU大鼠虹膜睫状体内mi R-146a、IRAK1和TRAF6 m RNA相对表达量分别为:2.33±0.06,1.68±0.23,1.57±0.28,ET大鼠虹膜睫状体内mi R-146a、IRAK1和TRAF6 m RNA相对表达量分别为:3.50±0.37,0.90±0.04,0.78±0.03。Western Blot检测EIU大鼠虹膜睫状体内IRAK1和TRAF6的蛋白相对表达量分别为:0.57±0.05和0.56±0.07,ET组IRAK1和TRAF6的蛋白相对表达量分别为:0.47±0.02和0.25±0.06。简言之,与EIU大鼠相比,ET大鼠眼内细胞因子TNF-a和IL-6表达降低,虹膜睫状体内IRAK1和TRAF6 m RNA及蛋白相对表达量均降低而mi R-146a表达增加,且差异均具有统计学意义（P＜0.05）。同时,免疫荧光结果显示ET大鼠虹膜睫状体内NF-κB P65荧光强度减弱。结论:LPS预处理可减轻EIU大鼠眼部炎症反应,该过程可能与上调mi R-146a表达后抑制IRAK1、TRAF6表达及NF-κB P65活化相关。
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