大量的临床观察与实验研究表明：四逆散在改善睡眠、提高睡眠质量方面具有独特的疗效，为阐明其改善睡眠作用的药效物质基础，本研究拟通过血清药物化学的方法，进行了四逆散改善睡眠作用的药效物质基础研究。本实验以四逆散冻干粉为研究对象，以中药指纹图谱技术和血清药物化学方法为主要研究手段。在开展了组成四逆散的四味药材中主要化学成分芍药苷、柚皮苷、柴胡皂甙A、甘草次酸含量测定的基础上，建立四逆散冻干粉的制备工艺及其质控标准，以保证实验样品的标准化；并在240nm、210nm波长下建立了四逆散冻干粉的HPLC指纹图谱。在同色谱条件下进行了四逆散冻干粉血清中移行成分及脑脊液中移行成分分析比较；并对脑脊液中生理活性物质进行认定。在上述实验结果的基础上，通过药效学验证，确认四逆散改善睡眠作用的药效物质基础。实验结果如下：实验结果表明：(1)四逆散的四味药材主要化学成分含量分别为芍药苷2．55％、柴胡皂甙A2．01％、柚皮苷3．17％、甘草次酸2．65％，均符合2005年版国家药典标准。(2)本实验加10倍量水，煎煮2次，每次1小时，并于70℃水浴浓缩至0．4g(生药)／ml，采用先煎煮后冷冻干燥的工艺(-40℃制冷，-20℃保冻2h，-10℃保冻16h，20℃干燥5h，35℃二次干燥2h。)制备的四逆散冻干粉冻型饱满，复水性好，呈淡黄色，网状疏松，水分小于1％，四逆散四味药材冻干粉主要成分含量测定结果分别为芍药苷不低于2．74％、柴胡皂甙A不低于2．32％、柚皮苷不低于3．31％、甘草次酸不低于2．70％。保证了实验样品的标准化。(3)四逆散冻干粉血清移行成分分析结果表明：血清中共有14个移行成分；血中移行成分来源认定的结果：其中1号成分属四逆散冻干粉中枳实可直接入血成分，2号成分为辛弗林，3号成分属四逆散冻干粉中甘草可直接入血成分，4号成分为芍药苷，5号成分是入血后产生的新化合物，在四逆散、各单味药及拆方后均没有的成分，6号成分属四逆散冻干粉中甘草可直接入血成分，7号成分属四逆散冻干粉中枳实可直接入血成分，8号成分为白芍的体内代谢转化物，9号成分为甘草的体内代谢转化物，1 0号成分为枳实体内代谢转化物，11号成分属四逆散冻干粉中甘草可直接入血成分，12号成分为柴胡皂甙C，13号成分为枳实与其它药物配伍经体内代谢所产生的新物质，成分13在柴胡、白芍、枳实、甘草各单味药冻干粉及其血清指纹图中均不存在，说明13号成分不是各单味药的体内代谢产物或直接入血成分，在四逆散去掉枳实后13号成分消失，说明该成分是枳实与其它药物的配伍在体内产生，在四逆散分别去掉柴胡、白芍、甘草后血清样品中13号成分仍存在，只是存在峰面积积分值上减小的变化，说明对于13号成分的产生，各药均有一定贡献，其中枳实对该峰的出现起到决定作用，14号成分为甘草次酸。(4)在确定了甲醇法制备脑脊液的基础上，连续给药7d，末次给药5h确定为最佳采集脑脊液时间，比较了给药前后脑脊液中成分的变化，并与血中移行成分相比较，分析发现，脑脊液中除戊巴比妥钠成分外，并无血中移行成分的进入。但大鼠脑脊液中的内源性物质分泌显著增多，以脑脊液中的内源性物质为观察指标，观察血清中主要移行成分的组分混和组(辛弗林芍药苷柴胡皂甙C甘草次酸)改善脑脊液成分结构的作用，结果该混和组增高脑脊液中内源性物质峰面积是四逆散组的3．2倍。(5)脑脊液中该内源性物质不是5-羟色胺、5-羟吲哚乙酸、去甲肾上腺素和多巴胺中的任何一种，至于该成分为何种物质有待进一步研究。(6)四逆散冻干粉对戊巴比妥钠所致小鼠睡眠时间的影响的结果表明：四逆散冻干粉可明显延长戊巴比妥钠所致小鼠睡眠时间，与空白组比较，具有极显著性差异(P＜0．01)，混和物组(辛弗林芍药苷柴胡皂甙C甘草次酸)优于四逆散冻干粉组。通过综合分析，最后初步认定了四逆散冻干粉改善睡眠作用的药效物质基础是辛弗林、芍药苷、柴胡皂甙C和甘草次酸的混和物(8．5：1：1．5：6．5)。上述研究结果，为四逆散改善睡眠作用机制的阐明及深层次的开发研究奠定了基础。