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洛美沙星(lomefloxacin,LMF)和阿莫西林(amoxicillin,AMX)分别属于氟喹诺酮类和β-内酰胺类抗生素,目前在临床兽药上应用十分广泛。二者在畜禽食品中的残留都会引起一系列后果,例如诱导耐药菌株的产生、敏感人群产生过敏反应等。因此,针对二者残留的快速检测方法的建立对控制动物性食品的卫生质量、保障消费者健康等方面都具有比较重要的社会和经济意义。 本研究旨在建立畜禽产品中洛美沙星和阿莫西林残留的间接竞争酶联免疫吸附(Ci-ELISA)检测方法。研究内容和结果如一下: 1.通过两种方法一碳二亚胺法和混合酸酐法分别把洛美沙星与阿莫西林两种半抗原和载体蛋白牛血清白蛋白与卵清蛋白偶联制备免疫原(LMF-BSA,AMX-BSA)和包被原(LMF-OVA,AMX-OVA)。制备的人工抗原经紫外扫描和免疫动物实验进行了鉴定,结果表明:偶联物的紫外吸收光谱明显具有药物和载体蛋白叠加的特征;通过免疫BALB/c小鼠制备抗血清利用ELISA方法进行检测也证明了免疫原利包被原的成功合成。 2.为了制备较多量的多克隆抗体,分别用LMF-BSA和AMX-BSA作为免疫原免疫新西兰纯种白兔。制备的抗血清分别用间接ELISA和间接竞争ELISA检测效价和特异性,结果如下:洛美沙星抗血清终点效价在1:640000以上,并且特异性良好;阿莫西林抗血清终点效价住1:64000左右,但是特异性不理想,经进一步试验验证表明,抗体更多的针对阿莫西林分解产物,究其原因是因为免疫原AMX-BSA在免疫过程中已发生部分分解所致。 3.通过优化条件,初步建立了洛美沙星的Ci-ELISA检测方法。选取的检测优化条件为:抗血清稀释度为1:40000,封闭液为1%的酪蛋白溶液,包被原LMF-OVA的稀释度为1:1000,辣根过氧化物酶标羊抗兔IgG(HRP-IgG)稀释度为1:10000。检测结果如下:回归线性方程为y=-0.2865x+0.3689,相关系数R=0.9962(其中y为B/B0,x为1g[LMF]),线性范围在0.05μg/ml-5μg/ml之间,检测限为0.024μg/ml。高低中三个浓度的批内和批间相对标准偏差的平均值分别为17.7%和23.2%,牛奶样品中的回收率在85%-120%之间。