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目的:1、研究ULK1 m RNA和蛋白在肾透明细胞癌和相应癌旁组织中的表达情况,探讨ULK1的表达与肾癌发生、发展的关系;2、研究ULK1抑制剂SBI-0206965对人肾癌细胞株A498增殖、凋亡的影响,探讨SBI-0206965在肾癌靶向治疗中潜在的临床应用价值。方法:1、采用实时荧光定量RT-PCR检测20对肾透明细胞癌和相应癌旁组织中ULK1 m RNA的表达水平。2、运用Western Blotting检测54对新鲜肾透明细胞癌和相应癌旁组织中ULK1蛋白的表达情况。3、采用Western Blotting方法检测A498、Caki-1、HEK293T、HK-C细胞株中ULK1蛋白的表达水平。4、采用MTS法检测不同营养条件(0.5%FBS、EBSS)、不同浓度(0、2.5、5、10、20、40μM)SBI-0206965作用于肾癌细胞A498后的生长增殖情况,绘制增殖曲线并比较分析。5、运用Western Blotting检测A498细胞在不同营养条件(0.5%FBS、EBSS)、不同浓度(0、5、10、20μM)SBI-0206965处理后凋亡相关蛋白PARP、Caspase8的表达情况。6、采用Cell Death Detection ELISA试剂盒检测肾癌细胞A498在不同营养条件(0.5%FBS、EBSS)、不同浓度(0、5、10、20μM)SBI-0206965处理后的凋亡水平。结果:1、实时荧光定量RT-PCR结果显示:在20对肾透明细胞癌和相应癌旁组织中,14对肾癌组织ULK1 m RNA表达水平较相应癌旁组织明显高表达,其占总对数的70%(14/20);而有5例癌旁组织ULK1 m RNA较相应癌组织呈高表达,其占总对数的25%(5/20);两者表达相近的有1例,占5%(1/20)。ULK1 m RNA在肾透明细胞癌组织和癌旁组织之间的表达差异比较具有统计学意义(P=0.0107)。2、Western Blotting结果显示:ULK1蛋白在54例配对的肾透明细胞癌组织和癌旁组织中均有表达,其中肾癌组织中ULK1蛋白表达明显高于癌旁组织有34例(34/54,62.96%),癌旁组织中ULK1蛋白表达明显高于癌组织的有9例(9/54,16.67%),癌组织和癌旁组织ULK1蛋白表达水平相近的有11例(11/54,20.37%)。肾透明细胞癌组织和相应癌旁组织中的ULK1相对灰度值的差异比较有统计学意义(P<0.05)。3、Western Blotting检测HEK293T、HK-C、A498、Caki-1细胞株中ULK1蛋白表达情况显示:在A498、Caki-1、HEK293T、HK-C细胞中均有表达ULK1蛋白,其中在A498细胞中ULK1蛋白表达水平相对最高。4、MTS结果显示:在低血清营养条件(0.5%FBS)下,A498细胞株随着SBI-0206965浓度的增加,A498细胞增殖抑制率随之递增。在2.5μM时的增殖抑制率与对照组(0μM)相比差异无明显差异(P>0.05),其余各浓度组(5、10、20、40μM)与对照组比较差异均具有统计学意义(P<0.01)。另外,各浓度间(2.5μM vs 5μM、5μM vs 10μM、10μM vs 20μM、20μM vs40μM)增殖抑制率的差异也具有统计学意义(P<0.01);与低血清营养条件的结果相类似,在完全血清饥饿条件(EBSS)下A498细胞株的增殖抑制率也随着SBI-0206965浓度增加而增加,各浓度组间差异具有显著统计学意义(P<0.01)。该结果表明SBI-0206965对肾癌细胞A498具有抑制增殖作用且呈浓度依赖性递增。5、Western Blotting分别检测A498细胞株在低血清营养条件和饥饿条件下经不同浓度SBI-0206965(5μM、10μM、20μM)处理后凋亡相关蛋白PARP、Caspase8的表达情况显示:与对照组(0μM)相比,A498细胞经不同浓度SBI-0206965处理后凋亡相关蛋白PARP、Caspase8均有不同程度的降解,且其降解水平随着药物浓度的升高而显著增强。6、Cell Death Detection ELISA试剂盒检测A498细胞株在低血清营养条件和饥饿条件下经不同浓度SBI-0206965处理后A498细胞凋亡情况显示:随着SBI-0206965浓度的增加,A498细胞凋亡程度随之增加。结论:1、在肾透明细胞癌组织中ULK1 m RNA和蛋白表达水平明显高于相应癌旁组织;2、ULK1抑制剂SBI-0206965在体外对肾癌细胞A498具有诱导凋亡和抑制增殖作用;3、ULK1有可能成为肾癌靶向治疗的新靶点,ULK1抑制剂SBI-0206965是一种潜在的抗肾癌靶向药物。