【摘 要】
：
基因打靶和RNA干扰是基因功能研究中的两种重要手段,为了在特定的组织和特定的发育时期内精确研究基因功能,通常将组织特异性或诱导性启动子与靶基因相融合,在特定的组织细胞
论文部分内容阅读
基因打靶和RNA干扰是基因功能研究中的两种重要手段,为了在特定的组织和特定的发育时期内精确研究基因功能,通常将组织特异性或诱导性启动子与靶基因相融合,在特定的组织细胞中引导基因的敲除或沉默。肾脏雄激素调控蛋白(KAP)基因是一种在肾小管上皮细胞中特异性表达的基因,其表达受到雄激素、雌激素和垂体激素等多种激素的调控。本实验室通过截短体分析获得了 147 bp的最小启动子片段Kap147,并在人血管紧张素(hAGT)基因中鉴定了一个1.4kb的增强子片段(hAGT-Kpn),体外细胞转染实验证明Kap147/Kpn杂合启动子在不改变细胞特异性的前提下具有比Kap147启动子更强的转录活性和更敏感的雄激素调控性。在此基础上,本论文将Kap147/Kpn杂合启动子与Cre重组酶基因相融合构建转基因小鼠,在活体水平上研究Kap147/Kpn杂合启动子的表达特性。通过转基因鼠的繁殖鉴定,成功培育了 Cre-FO-1、Cre-F0-2和Cre-F0-3三个独立的转基因小鼠系;经RT-PCR、荧光定量PCR及免疫组化分析证实在Cre-F0-2小鼠睾丸组织中特异性地存在Cre基因的表达,在其他转基因小鼠系及其他组织中均未发现表达;免疫组化实验证明Kap147/Kpn杂合启动子将Cre基因的表达特异性地定位于睾丸靠近附睾组织处的生精小管中;通过与RFP/EGFP荧光报告鼠杂交证明Kap147/Kpn杂合启动子引导的Cre重组酶可以有效在小鼠睾丸组织中进行基因重组,是一种可用的睾丸组织特异性基因打靶工具鼠。荧光定量PCR分析了 Cre基因在不同年龄小鼠睾丸中的表达变化。结果表明,Cre基因的表达随年龄的变化呈现出成年鼠表达量高,幼年和老年鼠表达量低的现象,暗示Cre基因的表达可能受到性激素的调控;比较Cre基因和内源性Kap基因在不同小鼠间的表达情况,证实Cre基因与内源性Kap基因的表达存在一定的相似性;直接对小鼠注射雄激素使Cre基因的表达上升约1.5-2倍,而注射雄激素抑制剂则使Cre基因的表达降低30%-70%,进一步证实Kap147/Kpn杂合启动子在小鼠体内仍然受到雄激素的调控。成功构建了Kap147/Kpn杂合启动子引导绿色荧光蛋白shRNA干扰序列表达的重组质粒,细胞实验初步探索了Kap147/Kpn杂合启动子在RNA干扰中的效果。荧光观察和RT-qPCR检测证实Kap147/Kpn启动子引导的干扰序列特异性地在LLC-MK2细胞中使egfp基因的表达降低约40%,而在其他细胞中无明显干扰效果,表明Kap147/Kpn杂合启动子在细胞特异性地引导RNA干扰方面有一定的应用潜力。
其他文献
发展江西海外贸易企业的对策宋增春我省自１９８５年设立第一家海外贸易企业以来，经过十多年的努力，海外贸易企业建设有较大发展。截止到１９９５年底，江西省共批准成立海外贸易性企业４９家，现在已正
本文研究的是D市教育局所属高中的绩效管理情况,通过对D市教育局所属高中的绩效管理过程进行了解分析,发现在D市教育局的绩效管理过程中存在一些问题。首先,绩效管理缺少体系性,没有相应的制度对管理的各个环节进行规范。第二,绩效管理过程中缺少相关主体间的相互沟通,管理的各环节中信息交流不够,沟通方式单调较为传统。第三,绩效考核形式性,绩效指标缺少量化,考核作用性不高。最后,绩效管理过程中社会公众参与度不高
如何打造一家具有米其林品质的意式餐厅？作为米其林三星餐厅世界名厨的Bombana似乎更有发言权。在他看来，做意餐一定要做到两个尊重。首先要尊重原味，通过选择顶级食材与保证出品稳定，为顾客提供原汁原味的意大利菜式；更重要的是尊重宾客，用不断提升的优质服务与精益求精的工匠精神，为宾客创造最好的体验。 从贝加莫到北京 意大利贝加莫，这里便是OPERA BOMBANA创始人Umberto Bomban
隐性课程在学校政策、课程计划上并没有明确规定,然而又是学校经验中常规的、有效的一部分。随着素质教育的不断完善,隐性课程的构建是近年来高校所着力进行的,图书馆作为高
在2014年9月的夏季达沃斯论坛上，李克强总理首次提出，要在960万平方公里土地上掀起“大众创业”“草根创业”的新浪潮，形成“万众创新”“人人创新”的新态势。 今年2月，《国务院关于大力推进大众创业万众创新若干政策措施的意见》正式发布，国内的创业者迎来了前所未有的发展环境和机遇，“创客”也从之前的一个小众群体进入所有大众视线。 中国的创业者在分别走过以“启蒙”和“创业”为特征的1.0和2.0时
现阶段我国经济增长进入新常态,发展放缓,所以需要通过“减税降费”来调动企业积极性,同时进一步推进对外开放,促进产业转型升级,进而促进经济高质量发展。而目前,我国利用外
河南鲁班张餐饮有限公司由张书安先生始创于1995年，经过19年的发展，现已成为河南省知名餐饮企业，旗下拥有10家直营店，分别为鲁班酒店、玺园、鲁班喜悦酒店、鲁班小馆、鲁班福捞、
钢琴协奏曲作为一种常见类型的器乐合作艺术,在教学、演出中由于各种条件的限制,往往会选择以钢琴对乐队协奏进行替代。代替乐队的钢琴缩编谱作为一种很好的音乐传播方式,受到了广泛的欢迎。协奏曲钢琴缩编谱以钢琴代替乐队,是一种局限性更小,可实现性更高,且能在最大程度上将音响效果进行复原的艺术表现形式,同时对于演奏双方在音乐合作、音乐创造等方面的能力提升有重要意义。德米特里·德米特里耶维奇·肖斯塔科维奇作为2
安阳电厂#9机组吸风机变频改造有效的降低了发电成本，提高了经济效益。
病患的症状、体征，病史等(下称“征侯”)，是临床中代价小、收集简便的重要诊断依据。依其评判原理，作者将疾病征候诊断价值定量识别的方法概括为以下几种主要类型。