微生物法不对称还原合成药物中间体1-苯乙醇的研究

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近年来,随着对不同光学异构体药物药理作用研究的进展及对消旋药物申报和使用的种种限制,手性药物的研究和开发已经成为国际新药研究的热点和方向。由此而来的手性化合物合成方法就成了手性药物能不能商品化生产的关键。许多研究者都在致力于研究和开发产物转化率高、手性选择性好的手性化合物合成路线,其中生物转化法由于其温和的反应条件及高度的手性选择性而受到人们的青睐。1-苯乙醇是许多重要手性药物的先导化合物,以微生物法高效合成单一光学构型的1-苯乙醇具有重要意义和良好的应用前景。文献中已经有了采用微生物法立体选择性地还原羰基化合物制备各种手性醇的报道,本文系统深入地研究了从土壤中筛选微生物还原苯乙酮制备手性1-苯乙醇。本文以DL-1-苯乙醇为唯一碳源,从土壤分离得到了370余株能在选择性平板上生长的菌株,以0.1%(v/v)DL-1-苯乙醇为底物进行转化,通过2,4-二硝基苯肼检测的方法得到了71株具有苯乙醇脱氢酶活性的菌株。而后以0.1%(v/v)苯乙酮为底物进行还原转化,通过2,4-二硝基苯肼检测的方法确定了其中15株就有高转化活性的菌株。再以筛选出的菌株进行苯乙酮的还原转化,利用液相色谱分析和手性液相色谱分析,得到了一株能够高效高立体选择性合成S-1-苯乙醇的菌株XC35-8.对XC35-8的产酶培养基的碳、氮源,初始温度和pH值以及转化过程中的各中参数进行了初步研究。结果表明:当选择碳源葡萄糖5g/L、氮源胰蛋白胨10g/L、pH7.0、温度30℃、培养时间30h时,摇床振荡转速200r/min通过完整细胞转化,底物苯乙酮浓度为0.6mL/L,同时加入6%异丙醇作为转化系统的辅助底物,用于增强转化体系内的薄弱的辅酶再生系统。pH7.0,30℃下经过24h的反应,产物S-1-苯乙醇的产率达83.4%,ee值99.5%。
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