炭角菌Xylaria sp.L1子实体多糖的分离纯化、结构表征及其抑菌机理研究

来源 :合肥工业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hy_mon
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炭角菌属是珍贵的药材,广泛分布于温带、热带和亚热带地区,因其具有良好的生物活性而备受关注。炭角菌中多糖的含量十分丰富,然而目前关于炭角菌多糖的研究十分匮乏。为了丰富炭角菌的研究内容,提高其应用价值以及避免造成炭角菌资源的浪费,本论文以炭角菌Xylaria sp.L1为实验材料,从炭角菌的营养成分测定、炭角菌多糖的分离纯化、结构表征及生物活性等方面展开研究,为炭角菌Xylaria sp.L1的综合利用以及相关产品开发提供科学依据。主要研究内容和结论如下:1、照相关的国家标准测定了炭角菌Xylaria sp.L1子实体中化学成分的含量。结果表明,100 g炭角菌子实体中含灰分6.65 g、粗纤维13.19 g、总糖19.04 g、脂肪2.58 g、蛋白质24.72 g、钠312.41 mg、钾2 606.69 mg、钙17.85 mg、镁136.62 mg、铁20.40 mg、铜1.55 mg、锌42.81 mg、锰2.78 mg、硒0.015 mg,15种游离氨基酸总量5 404.19 mg/100g,从炭角菌子实体中共鉴定出41个化合物,包含了6个萜类化合物、4个苯丙素类化合物、14个生物碱类化合物、10个长链不饱和脂肪酸类化合物、7个甾体类化合物,其中有18个化合物为痂状炭角菌Xylaria sp.L1子实体中首次发现。2、炭角菌子实体经过粉碎后得到炭角菌子实体粉末,其粉末经过热水提取、80%乙醇沉淀、AB-8大孔树脂脱色以及Sevag试剂脱蛋白等步骤得到粗多糖(XYLP)。采用DEAE-Cellulose离子交换柱层析法对XYLP进行了分离纯化,得到两个组分XYLP-I和XYLP-II,并对其中分子量均一的水溶性组分XYLP-II展开了研究。高效液相渗透色谱的结果表明XYLP-II,是分子量分布均一的多糖,分子量大小为345.43 k Da;XYLP-II的总糖含量为88.53%,基本不含糖醛酸、蛋白质、淀粉和核酸类物质。对XYLP-II进行结构分析,结果表明,XYLP-II完全由葡萄糖组成,是中性葡聚糖;结合单糖组成、红外光谱、甲基化分析、1D/2D NMR分析初步得出XYLP-II的主链主要由→6)-β-Glcp-(1→2)-α-Glcp-(1→2,6)-β-Glcp-(1→和→6-β-Glcp-(1→2,6)-β-Glcp-(1→组成,其中→2,6)-β-Glcp-(1→的O-2位有分支,而支链则是α-Glcp-(1→。3、探究了XYLP-II的抗菌活性和抗菌机理。结果表明,XYLP-II对金黄色葡萄球和枯草芽孢杆菌具有抑菌作用,对于大肠杆菌没有明显的抑菌作用。其中,XYLP-II对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的抑菌圈直径达到了18.20±0.23 mm和13.40±0.74mm,通过对XYLP-II的抗菌活性进一步研究发现,XYLP-II对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的最小抑菌浓度值分别为5 mg/m L和10 mg/m L,并且XYLP-II对于两种菌的抑制作用呈现剂量依赖性。此外,金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌发酵液中的电导率、蛋白质含量、AKP和β-半乳糖苷酶活性增加。XYLP-II的抑菌机理的研究结果表明,炭角菌多糖通过破坏细菌细胞壁和细胞膜,增加细胞通透性,导致结构损伤和细胞成分释放,从而导致细胞死亡,从而发挥杀菌活性。
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