柑橘果皮和葡萄籽中黄酮与原花青素的离子液体提取分离技术研究

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天然活性物质如多酚化合物、生物碱、氨基酸与生物活性肽的开发利用已成为食品、生物、医药等领域的重要研究课题。众多活性物质中,多酚始终是研究人员关注的焦点,其具有多种显著的活性,包括抗氧化、抗炎、抑菌、降血压等生物活性。水果加工副产物富含天然活性成分,比如柑橘果皮和葡萄籽均含有大量的多酚化合物,是获取活性多酚的重要来源。提取、分离和纯化是获取高纯度多酚的重要途径,也是开发利用活性多酚的基本前提。然而,传统提取方法存在有毒有机试剂消耗量大、设备成本过高、对环境污染严重等缺点。离子液体是21世纪发展极为迅速的一种绿色溶剂,具有提取效率高且不易挥发等优点,在提取、分离及纯化领域具有巨大的应用潜力。本论文以离子液体为基本溶剂,并结合超声辅助提取以及双水相萃取技术,建立柑橘果皮和葡萄籽中多酚物质的新型提取、分离及纯化方法。主要研究内容包括以下几个方面:一、离子液体–超声辅助提取柑橘果皮中的黄酮类化合物。采用离子液体作为提取溶剂,结合超声辅助提取方法对柑橘果皮中的黄酮类化合物进行提取。通过比较分析季膦盐类与胆碱类离子液体的提取率,发现季膦盐类离子液体的提取率明显高于胆碱类离子液体,其中三丁基己基溴化膦的提取率最高,达到56.15mg/g。通过单因素实验和响应面曲线法优化离子液体-超声辅助提取的条件,结果表明离子液体浓度为54%、料液比为1:10、提取温度为50℃、提取时间10 min时,可获得最大的提取率(69.13 mg/g)。超声辅助提取结束后,采用反萃取法分离提取液中的黄酮化合物并回收离子液体。所选用的反萃取溶剂中,正丁醇的反萃取效率最高,黄酮化合物的回收率可达80.11%。二、乙醇+离子液体+(NH42SO4双水相体系提取分离葡萄籽中的原花青素。比较不同无机盐/乙醇双水相的分相能力,发现乙醇/(NH42SO4双水相体系对原花青素具有较高的分配系数和萃取效率。为了进一步提高乙醇/(NH42SO4双水相体系的萃取效率,选用离子液体作为添加剂改善萃取性能。结果表明,5%[C6mim]BF4能够将原花青素的萃取率从47.89%–52.42%显著提高至97.23%–97.79%。单因素实验结果表明,葡萄籽中原花青素的双水相提取分离的适宜条件为:29%乙醇、19%(NH42SO4、4%[C6mim]BF4、料液比1:20 g/mL、提取温度40℃、提取时间20 min、pH=5。适宜条件下,儿茶素、表儿茶素和原花青素B2的双水相提取率分别达到1.21、1.22和0.14 mg/g,明显高于甲醇、乙醇、氯仿等有机溶剂的提取率。三、离子液体双水相中多酚化合物的分配规律。筛选[C4min]Br和[P4444]Br两种化合物为离子液体的代表,分别与Na2SO4、K2HPO4、Na2CO3、(NH42SO4和K3C6H5O7构建双水相体系。测定代表性多酚(酚酸:绿原酸、咖啡酸、原儿茶酸;黄酮:牡荆素、芹菜素、橙皮素、新橙皮苷、芸香柚皮苷)在不同双水相中的分配系数。分配系数结果表明多酚化合物的分配不仅受到盐的类型的显著影响而且受到pH的显著影响。因此,可以通过选择合适的盐或调整pH调控多酚化合物的分配,实现选择性萃取,获得较高萃取效率。
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