【摘 要】
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目的1.观察自拟方消抗六味地黄汤治疗免疫性不育症的临床疗效和安全性,提供滋肾解毒通络法改善免疫性不育症临床疗效的循证医学证据。2.探讨自拟方消抗六味地黄汤逆转LPS诱导的炎症反应导致的大鼠免疫性不育症的作用机制,为滋肾解毒通络法治疗免疫性不育症提供实验数据支撑。方法1.将来自赣南医学院第一附属医院中西结合男科门诊2017年5月至2020年11月就诊,符合相关诊断标准,并将取得患者知情同意的80例免
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目的1.观察自拟方消抗六味地黄汤治疗免疫性不育症的临床疗效和安全性,提供滋肾解毒通络法改善免疫性不育症临床疗效的循证医学证据。2.探讨自拟方消抗六味地黄汤逆转LPS诱导的炎症反应导致的大鼠免疫性不育症的作用机制,为滋肾解毒通络法治疗免疫性不育症提供实验数据支撑。方法1.将来自赣南医学院第一附属医院中西结合男科门诊2017年5月至2020年11月就诊,符合相关诊断标准,并将取得患者知情同意的80例免疫性不育症患者采用单中心随机数字表法进行分组,分别给予自拟方消抗六味地黄汤治疗的治疗组和给予醋酸泼尼松片治疗的对照组,每组各取40例。使用统一的观察表格《免疫性不育患者临床观察登记表》对全部研究对象进行问卷观察,并从病例筛选和抗精子抗体检查规范上作质量控制。应用制作好的观察登记表,收集所需要患者信息,结束治疗后,根据上述标准评定治疗效果,并按相应统计方法对治疗前、治疗后疗效进行客观的统计分析,评价药物疗效。2.利用LPS诱导大鼠免疫不育模型,利用ELISA检测大鼠抗精子抗体（AsAb）和Tunel检测细胞凋亡判断模型是否成功以及选择的自拟方消抗六味地黄汤剂量;实验分组:将30只SD雄性大鼠,分成正常对照组（n=6）、LPS组（n=6）、LPS低剂量组（n=6）、LPS中剂量组（n=6）、LPS高剂量组（n=6）。将自拟方消抗六味地黄汤低剂量（15.12g/kg）、中剂量（30.24g/kg）、高剂量（45.36g/kg）设置成低、中、高三个浓度组。24小时后取样。应用HE检测各组睾丸组织的病理情况,应用Tunel检测各组睾丸组织的凋亡情况,利用ELSIA检测各组清中睾酮、LH、FSH的含量和睾丸组织中IL-1β、TNFα、AsAb和MDA含量,显微镜下精子计数,Western blot检测各组睾丸组织中Bax和TLR2表达。结果1.纳入研究的80例患者中,最终完成临床试验且数据完整的合格病例共有74例,其中治疗组38例,精浆AsAb转阴且配偶妊娠17例,妊娠率为44.74%;精浆AsAb转阴配偶未妊娠19例,总有效率达到94.74%;对照组36例,配偶妊娠5例,妊娠率为13.89%;精浆AsAb转阴配偶未妊娠20例,总有效率为69.44%,治疗组与对照组在妊娠率和总有效率方面均存在统计学差异（P＜0.05）。2.免疫不育模型构建成功,自拟方消抗六味地黄汤剂量选择15.12g/kg、30.24g/kg和45.36g/kg剂量作为后续实验的剂量。正常组生精小管基膜内可见排列整齐的各级生精细胞。脂多糖（LPS）处理组生精细胞细胞稀疏、间隙增大、层数减少,各级生精细胞脱落。干预药物15.12g/kg、30.24g/kg和45.36g/kg剂量组生精小管形态结构、生精细胞数目根据给药剂量逐渐得到改善。与对照组相比,LPS组睾丸组织的细胞凋亡明显升高,相对精子数明显下降,血清中睾酮、LH、FSH的含量明显下降,睾丸组织中IL-1β、TNFα、AsAb和MDA含量明显升高,睾丸组织中Bax和TLR2表达明显升高,异具有统计学意义（P＜0.05）;与LPS组相比,15.12g/kg、30.24g/kg和45.36g/kg剂量组的细胞凋亡明显下降,相对精子个数明显增多,血清中睾酮、LH、FSH的含量明显升高,睾丸中IL-1β、TNFα、AsAb和MDA含量明显下降,睾丸中15.12g/kg、30.24g/kg和45.36g/kg剂量组TLR2表达显著降低,30.24g/kg和45.36g/kg剂量组的Bax表达显著降低,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论1.临床验证滋肾解毒通络法治疗免疫性不育症疗效确切,与对照组相比明显降低了患者精液中AsAb阳性率,提高了患者配偶受孕率,差异具有统计学意义（P＜0.05）,且中药治疗组不良反应少,无明显毒副作用,安全性更高,本法值得推广。2.自拟方消抗六味地黄汤可以改善LPS诱导的炎症反应,可使大鼠附睾精子计数明显升高,抑制凋亡,改善生殖功能。并且会降低Bax和TLR2表达水平,从而提高模型大鼠的精液质量。
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