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目的: 本课题采用已故“国医大师”张镜人教授临床经验方——至真方体内干预人结肠腺癌干细胞裸鼠皮下移植瘤模型，观察其对肿瘤生长的抑制及多药耐药的逆转作用，并探究其对SOX2、NF-κB、ABCG2蛋白的调节作用，为中药逆转大肠癌多药耐药的临床应用提供实验依据。 方法: 第一章:采用无血清悬浮培养法富集HCT-116/SP细胞，通过生物学观察、Real-time PCR、Western blot检测证明其具备肿瘤干细胞特性;将HCT-116、HCT-116/SP皮下注射制备荷人大肠癌种鼠，运用移植瘤接种构建人大肠癌裸鼠移植瘤模型。Western blot检测ABCG2蛋白，验证HCT-116/SP组裸鼠瘤体保持干细胞多药耐药特性; 第二章:复制模型，将HCT-116细胞构建的裸鼠荷瘤模型随机分为HCT-116组、HCT-116+5-FU组，HCT-116/SP细胞构建的裸鼠荷瘤模型随机分为HCT-116/SP组(NC)、HCT-116/SP+5-FU组(5-FU)、HCT-116/SP+至真方低、中、高剂量组(ZZR-L、M、H)、HCT-116/SP+联合用药组(5-FU+ZZR)。药物干预28天后处死取瘤，通过观察各组瘤体大小差异、Western blot检测ABCG2蛋白、HE染色验证模型具备多药耐药特性，并分析至真方抑瘤和逆转耐药的作用; 第三章:模型建立、分组及用药情况同第二章。Western blot检测瘤体SOX2、NF-κB/P65、ABCG2蛋白的表达。 结果: 第一章:HCT-116/SP细胞裸鼠移植瘤模型的建立 1、通过无血清悬浮培养法富集具备肿瘤干细胞特性HCT-116/SP细胞，HCT-116/SP细胞中SOX2、ABCG2、CD44基因2-ΔΔCT值分别(20.925±1.650)、(15.126±1.808)、(20.706±1.505)，明显高于HCT-116细胞(P＜0.01);HCT-116/SP中SOX2、ABCG2、CD44蛋白的相对灰密度值分别为（0.651±0.0234）、（0.566±0.0400）、（0.409±0.0098）均明显高于HCT-116（0.139±0.0256）、(0.112±0.0200)、(0.091±0.0025)(P＜0.01)。 2、运用HCT-116、HCT-116/SP细胞制备裸鼠移植瘤模型，HCT-116/SP组、HCT-116组瘤体体积分别为:611.59±152.18mm3、198.12±46.20mm3，两者相比有统计学差异(P＜0.05)，且HCT-116/SP组移植瘤中ABCG2蛋白表达量(3.288±0.1259)明显高于HCT-116组裸鼠瘤体(1.542±0.1868)。 第二章:至真方对HCT-116/SP细胞裸鼠移植瘤增殖、耐药的影响 1、复制上述模型，待瘤体长至100mm3时，将HCT-116细胞构建的裸鼠荷瘤模型随机分为HCT-116组、HCT-116+5-FU组，HCT-116/SP细胞构建的裸鼠荷瘤模型随机分为HCT-116/SP组(NC)、HCT-116/SP+5-FU组(5-FU)、HCT-116/SP+至真方低、中、高剂量组(ZZR-L、M、H)、HCT-116/SP+联合用药组(5-FU+ZZR)。应用相应药物干预，4周后处死取瘤。HCT-116/SP组裸鼠肿瘤体积(3631.69±316.41mm3)明显较HCT-116组（783.77±125.81mm3）大（P＜0.01）;5-FU对HCT-116组和HCT-116/SP组瘤体抑制率分别为:34.01％、23.70％，5-FU对HCT-116/SP组移植瘤的抑制作用明显较HCT-116组弱（P＜0.05）;Western blot检测提示HCT-116/SP组瘤体ABCG2的表达量(3.288±0.1259)高于HCT-116组(1.542±0.1868)(P＜0.05);HE染色观察，两组肿瘤均具备人大肠癌组织细胞形态，且HCT-116/SP组恶性程度较高; 2、HCT-116/SP、HCT-116/SP+至真方低、中、高剂量组、HCT-116/SP+联合用药组瘤体大小分别为:3631.69±316.41mm3、3303.16±286.15mm3、2602.53±213.81mm3、2036.53±174.60mm3、731.64±146.00mm3。HCT-116/SP与HCT-116/SP+至真方低剂量组之间无显著差异(P＞0.05)，而随着至真方浓度增加，瘤体体积逐渐减小(P＜0.05)。HCT-116/SP+联合用药组瘤体(731.64±146.00mm3)明显小于HCT-116/SP+5-FU组(2771.13±230.09mm3)(P＜0.01)。提示至真方能显著抑制HCT-116/SP裸鼠移植瘤的增殖，并能增加HCT-116/SP裸鼠移植瘤对5-FU的化疗敏感性。 第三章:至真方调节人大肠癌干细胞裸鼠移植瘤SOX2、NF-κB、ABCG2蛋白的表达 1、SOX2、P65、ABCG2蛋白在5-FU组、联合用药组表达量分别为(0.736±0.0502)、(0.056±0.0025);(0.774±0.0365)、(0.104±0.0143);(0.659±0.0336)、(0.095±0.0054)，联合用药组与5-FU组相比，SOX2、P65、ABCG2蛋白的表达明显下降(P＜0.05); 2、Western blot分析提示，HCT-116/SP、HCT-116/SP+至真方低、中、高剂量组移植瘤细胞中SOX2蛋白的表达分别为(0.262±0.0232)、(0.208±0.0326)、(0.126±0.0210)、(0.073±0.0017);P65蛋白的表达分别为(0.674±0.0354)、(0.513±0.0263)、(0.395±0.0180)、(0.073±0.0202);ABCG2蛋白的表达分别为(0.237±0.0359)、(0.192±0.0241)、(0.133±0.0167)、(0.089±0.0241),说明至真方能下调SOX2、P65、ABCG2蛋白的表达(P＜0.05)，在一定范围内呈浓度依赖性调控(P＜0.05)。 结论: 1、无血清悬浮培养法可有效分离HCT-116/SP，并能成功构建HCT-116/SP细胞荷瘤裸鼠模型，肿瘤具有多药耐药特性。 2、至真方可抑制人大肠癌干细胞裸鼠移植瘤的生长，并能有效逆转其多药耐药特性，且在一定浓度范围内呈量效相关。 3、至真方能有效抑制SOX2、NF-κB/P65、ABCG2蛋白表达，这可能是其抑制人大肠癌干细胞裸鼠移植瘤生长、逆转化疗耐药性的机制之一。