定点编辑人jmjd3基因的TALEN质粒构建及jmjd3基因敲除对人宫颈癌细胞体外效应观察

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目的:利用TALEN技术构建编辑人jmjd3基因的TALEN质粒,并观察Jmjd3敲除后人宫颈癌细胞体外生长情况。方法:构建编辑人jmjd3基因的TALEN质粒载体(TALEN左臂质粒L1及TALEN右臂质粒R1),经酶切鉴定,测序验证;用TALEN左臂L1、TALEN右臂R1、EGFP荧光质粒共同转染人宫颈癌细胞系Hela,同时设未转染的宫颈癌细胞为空白对照,转染24小时后计算转染效率。随后采用浓度为2ug/ul嘌呤霉素溶液进行筛选至空白对照组细胞全部死亡(>3d),共转染组细胞继续培养,行RT-PCR检测宫颈癌细胞内jmjd3 m RNA表达水平,MTT检测细胞增殖活力。结果:经酶切鉴定,DNA测序及blast比对分析证实成功构建编辑人jmjd3基因TALEN质粒对;转染后Hela细胞与空白对照组相比,可见质粒共转染组jmjd3m RNA表达水平明显降低,表达抑制率为(46.5±2.0)%;MTT检测表明质粒共转染组细胞增殖能力明显受到抑制,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:1、针对人jmjd3基因位点人工构建的TALEN质粒,可实现对人基因组jmjd3基因位点的编辑。2、编辑jmjd3基因可使宫颈癌细胞系Hela细胞增殖能力明显受到抑制,说明jmjd3参与宫颈癌细胞增殖调控。
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