【摘 要】
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该工作是以链霉菌为表达系统，克隆并表达人的可溶性白细胞介素1受体Ⅰ型。pSGL1是该实验室从S。globisporus中分离到的一新质粒。为了将该质粒发展成有用的克隆载体，该工作首先
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该工作是以链霉菌为表达系统，克隆并表达人的可溶性白细胞介素1受体Ⅰ型。pSGL1是该实验室从S。globisporus中分离到的一新质粒。为了将该质粒发展成有用的克隆载体，该工作首先测定了该质粒的最小复制子核苷酸列，经检索是一个新的序列，并且确定了其属于滚环复制类型的质粒;然后以S。globisporus总DNA为模板，采用PCR方法扩增得到含有C1027前蛋白信号肽gpp及其调控序列的DNa片段;将其插入pSGL1的衍生质粒pSGLN，构建了新的链霉菌-大肠相菌穿梭质粒载体pSGLGpp。从hepG2细胞中提取总RNA，采用RT-RCR方法扩增得到人的可溶性白细胞介素1受体Ⅰ型(sIL-1RI)的cDNA，经序列测定表明结果正确。为了观察gpp和me1C1信号肽调控序列启动sIL-1RI的分泌表达，将区犁重组菌株分别在酷蛋白发酵培养基中发酵到72hr，于24hr，48hr和72hr取样。发酵液经SDS-PAGE和Westernblot证实分泌表达了sIL-1RI，经蛋白印迹受体配基结合反应证实分泌表达的sIL-1RI具有配基受体结合的生物学活性。
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