论文部分内容阅读
研究目的:以先前基因芯片结果为基础,确证维生素K2对人肝癌细胞株HuH-7增殖的抑制作用及其对成纤维细胞生长因子受体3(FGFR3)的下调作用,力图为维生素K2的临床应用及人类肝癌靶向治疗提供新的实验依据。研究方法:(1)、以MTT法检测维生素K2对HUH-7细胞增殖的抑制作用;(2)、以半定量RT-PCR法检测0、10、30μM维生素K2干预后HuH-7细胞中FGFR3和FGFR1的mRNA表达;(3)、以实时定量PCR法检测0、10、30μM维生素K2干预后HuH-7细胞中FGFR3和FGFR1的mRNA表达;(4)、以Western-blot法检测不同浓度维生素K2处理后的HuH-7细胞中FGFR3蛋白表达。研究结果:(1)、维生素K2对HuH-7细胞生长有抑制作用。10、30μM维生素K2干预组对HuH-7细胞的抑制率与无药对照组比较,72、96h有显著性差异(P＜0.01),0.01、0.1、1μM维生素K2干预组对HuH-7细胞的抑制率与无药对照组比较,48、72及96h均无显著性差异(P＞0.05);30μM维生素K2抑制HuH-7细胞增殖呈时间依赖性。(2)、RT-PCR示96h后10、30μM维生素K2干预组能呈剂量依赖性抑制HuH-7细胞中FGFR3 mRNA表达,而未明显抑制HuH-7细胞中FGFR1 mRNA表达;(3)、实时定量PCR示96h后10、30μM的维生素K2干预组中FGFR3 mRNA表达分别为无药对照组的0.692±0.087倍(p=0.0124,＜0.05)和0.385±0.053倍(p＜0.0001),均有显著性差异,10、30μM的维生素K2干预组之间亦存在显著性差异(p=0.0236,＜0.05);96h后10、30μM的维生素K2干预组中FGFR1 mRNA表达分别为无药对照组的0.938±0.051倍(p=0.2921,＞0.05)和0.933±0.096倍(p=0.5230,＞0.05),均无显著性差异;10、30μM的维生素K2干预组之间亦无显著性差异(p=0.9678,＞0.05);(4)、Western-blot法检测结果示96h后10、30μM的维生素K2干预组中FGFR3的蛋白表达较无药对照组及10、30μM维生素K2干预组之间(125 KDa,135 KDa)均存在显著性差异(p＜0.01)。研究结论:(1)、维生素K2能呈时间和剂量依赖性抑制HuH-7细胞增殖;(2)、维生素K2可能通过下调FGFR3的表达来抑制HuH-7细胞增殖;(3)、维生素K2抑制HUH-7细胞的增殖可能与FGFR1的表达量无关。