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第一部分wortmannin抑制PI3K信号通路对人甲状腺滤泡癌细胞迁移侵袭能力的影响目的:研究wortmannin对人甲状腺滤泡癌细胞CGTHW-1迁移和侵袭能力的影响,并初步探索其作用机制。方法: MTT法检测wortmannin对细胞的生长抑制率,筛选出wortmannin最佳作用浓度及时间。将细胞分为实验组和对照组(分别在血清饥饿和含10%小牛血清两种条件下培养)。实验组用wortmannin进行处理,对照组不添加任何处理因素。通过划痕实验观察wortmannin对细胞迁移能力的影响;Transwell小室侵袭实验观察wortmannin对细胞侵袭能力的影响;免疫荧光观察细胞在wortmannin作用后的细胞骨架情况,了解细胞形态学变化;免疫细胞化学检测wortmannin对细胞Rac1蛋白表达的影响;RT-PCR法检测wortmannin对细胞Rac1mRNA表达量的影响。结果:在血清饥饿的情况下实验组与对照组两组细胞迁移均受抑制;Transwell小室侵袭实验示侵袭至聚碳酸酯微孔膜下层细胞数没有统计学差异,而给细胞添加血清后,经wortmannin处理的细胞划痕愈合速度减慢,CGTHW-1细胞在24h后侵袭至小室下层的细胞数(13.8±3.03)明显低于对照组(41.6±6.95,p<0.01);免疫细胞化学显示Rac1蛋白主要表达在胞浆,少部分在胞膜,经wortmannin作用后,CGTHW-1细胞中Rac1蛋白的平均光密度值(0.1260±0.0152)显著低于对照组(0.2568±0.0540),P<0.01;RT-PCR结果显示,wortmannin处理组与对照组中Rac1mRNA的RT-PCR产物相对吸光度值分别为(0.5533±0.0251)和(0.9200±0.026)(P<0.01),两组比较差异具有统计学意义;免疫荧光示在wortmannin作用后细胞层状伪足减少,细胞变圆。结论:在含10%小牛血清培养基培养细胞下,PI3K特异性抑制剂wortmannin能有效抑制人甲状腺癌细胞迁移和侵袭,其作用机制可能是通过在一定程度上抑制了PI3K下游分子Rac1的表达,从而引起细胞骨架重构实现的。第二部分整合素β4在高低转移潜能甲状腺滤泡癌细胞中的表达及其意义目的:探讨整合素β4对人高低转移潜能甲状腺滤泡癌细胞亚系侵袭能力的影响。方法:利用肿瘤细胞穿透人工基底膜能力的差异筛选出高、低转移潜能的甲状腺滤泡癌细胞系;采用免疫细胞化学、western blot及半定量RT-PCR检测整合素β4在高低转移潜能甲状腺滤泡癌细胞中的表达情况。结果:成功筛选出高、低转移潜能的甲状腺滤泡癌细胞亚系;免疫细胞化学,western Blot,半定量RT-PCR显示高转移潜能甲状腺滤泡癌细胞中整合素β4在蛋白和基因水平的表达均显著高于低转移潜能甲状腺滤泡癌细胞[ ( 0.2775±0.0340 ) vs(0.1875±0.0222)、( 0.0997±0.0185 ) vs ( 0.0390±0.0102 )、( 0.5550±0.1012 )vs(0.2700±0.0299),均p<0.01)]。结论:整合素β4在人甲状腺滤泡癌侵袭过程中发挥有重要作用,可能成为抑制甲状腺癌转移的靶向分子。