脯氨酸特异内切酶（Proline Specific Endopeptidases, EC 3.4.21.26, PSEases）是一类特异性降解脯氨酸残基羧基端肽键的裂解酶。该酶分属于脯氨酰内肽酶类,广泛的分布于植物、哺乳动物、细菌和真菌体内,该类酶在结构上有较高的同源性,但其在催化机理及功能上却存在很大的差异。已有报道显示,不同生物体内的脯氨酰内肽酶的催化机制相差很大,即使在同一生物体内的不同器官和组织中,该类酶的作用机理也不相同。基于目前对该类酶的研究进展,以及其应用价值的开发前景,寻求一种可以满足国内市场需求的生物酶,既是一种机遇,也是一种挑战。本研究委托生工生物工程（上海）有限公司合成了脑膜炎败血型黄杆菌（Flavobacterium meningsepticum）的脯氨酸特异内切酶的cDNA片段。本研究将该基因连接到载体pGBTNH上,转化大肠杆菌BL-21 star,获得了表达融合蛋白GBl-PSEase的重组菌。通过SDS-PAGE和Western-Blot检测发现,该融合蛋白的相对分子质量为84.5 kDa,和理论值一致,通过镍离子柱亲和层析纯化了GBl-PSEase融合蛋白,并对其酶学性质进行了分析。本研究以Z-Gly-Pro-pNA为底物,检测了GBl-PSEase的酶学性质,结果显示,GBl-PSEase降解Z-Gly-Pro-pNA的Km值为0.921 mM/min, Vmax为0.666 mM/min,最适pH为6.4,最适反应温度为37℃。本研究还发现,GBl-PSEase在高于pH 6.4条件下的稳定性比低于pH 5.0的条件下的稳定性高；在低于37℃时的稳定性比高于37℃时的稳定性高。本研究检测了不同金属离子对GBl-PSEase降解Z-Gly-Pro-pNA的影响,发现1 mmol/L的Ca²⁺和Mn²⁺可以将GBl-PSEase的水解活力分别提高18.57%和23.73%,1 mmol/L的Mg²⁺、Cu²⁺、Ni²⁺和Zn²⁺则可以将GBl-PSEase的水解活力分别降低24.83%、4.55%、18.06%和43.05%：5 mmol/L的Ca²⁺、Mg²⁺和Mn²⁺可以将GBl-PSEase的水解活力分别提高43.42%、8.44%和61.96%,而5 mmol/L的Cu²⁺、Ni²⁺和Zn²⁺却可以将GBl-PSEase的水解活力分别降低55.73%、46.25%和43.05%。说明金属离子对GBl-PSEase水解活力的影响不仅与离子的性质有关,还与离子浓度有关。本研究检测了GBl-PSEase的贮藏稳定性,发现GBl-PSEase冻干粉在4℃条件下存放3个月,其水解活力仅下降了9.57%,而液体状态下的GBl-PSEase水解活力则下降了37.44%,说明GBl-PSEase冻干粉更适合长久保存。