目的:本研究旨在验证HSPA5新型转录后修饰——甲基化修饰的存在,研究甲基化修饰在肿瘤细胞中的表达,构建稳转系、研究HSPA5甲基化修饰在头颈鳞癌细胞中的作用,尝试寻找其作用的机制。方法:1.通过western blot技术验证HSPA5-K585Me识别抗体;检测不同口腔肿瘤细胞系HSPA5甲基化表达。2.通过CRISP-Cas9系统敲除内源性蛋白表达,再过表构建甲基化修饰表达的野生型、突变型稳转系。通过CCK8、单克隆、迁移、周期凋亡、药物敏感性、裸鼠皮下成瘤等探讨甲基化HSPA5对肿瘤细胞生物学行为的影响。3.通过药物刺激、Co-IP实验探讨甲基化修饰可能的作用机制。结果:1.HSPA5-K585Me能够得到有效的抗体识别。在不同口腔肿瘤细胞中,HSPA5-K585Me表达水平不一:Cal27细胞系中甲基化修饰表达最高,HN6细胞系中修饰水平最低;给与相同TM刺激后,Cal27甲基化修饰仍维持在最高水平,而HN6细胞仍然表达最低;其他肿瘤细胞系蛋白表达水平介于两者之间。2.成功构建稳转系后,通过一系列生物学行为研究发现:甲基化修饰丢失的HSPA5肿瘤细胞增殖速度较快、单克隆形成能力更强、迁徙更快、对顺铂等药物更敏感,裸鼠皮下成瘤能力更强。3.给与浓度梯度TM刺激后,随着刺激强度增加,内质网应激反应逐渐增强。但是反应略有不同。在HN6细胞中随着刺激强度增加,甲基化修饰水平持续较低、甚至降低、PERK表达水平持续升高;Cal27细胞中PERK表达水平逐渐降低而甲基化修饰逐渐升高。Co-IP中甲基化修饰与PERK蛋白结合增多。甲基化修饰与PERK存在一定的相关性。