ST6GalⅠ在肾透明细胞癌中的表达对癌细胞生长及凋亡影响的研究

来源 :新疆医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:LIU73558109
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目的:1)通过免疫组化法检测人β半乳糖苷α-2,6-唾液酸转移酶Ⅰ(ST6Gal I)在肾透明细胞癌(cc RCC)癌组织及正常肾组织中表达的差异,探讨ST6Gal I的表达与肾透明细胞癌患者病理特征的相关性。2)研究α-2,6-唾液酸转移酶Ⅰ(ST6Gal I)对巨噬细胞极化的影响并探究其对肾透明细胞癌的作用。3)通过q RT-PCR和Western blot检测ST6Gal I、TNFR1在肾透明细胞癌细胞株中表达及两者的相关性分析,探究ST6Gal I对肾透明细胞癌细胞凋亡的影响及机制。方法:1)收集以2013年1月-2019年12月来院就诊的病理结果明确诊断为肾透明细胞癌患者127例为研究对象。应用免疫组化法检测癌组织及同一患者正常肾脏组织中的ST6Gal I表达。分析ST6Gal I在癌组织及正常肾脏组织中的表达水平的差异及不同病理特征中表达差异,两组ST6Gal I阳性表达率比较以及ST6Gal I的表达与临床病理特征之间关系的比较采用χ~2检验。2)利用脂质体法转染si RNA-ST6Gal I至THP-1细胞,50ng/m L PMA与20ng/m L IL-4诱导转染后的THP-1细胞,q RT-PCR和流式细胞术检测巨噬细胞极化情况。建立巨噬细胞与786-O细胞共培养体系,MTT法和流式细胞术检测细胞的存活与凋亡,细胞划痕实验检测细胞迁移变化,ELISA检测细胞上清液中炎症相关因子含量,Western blot检测细胞中T细胞免疫球蛋白黏蛋白-1(TIM-1)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达。3)q RT-PCR和Western blot检测ST6Gal I在肾透明细胞癌细胞株中的表达,然后构建ST6Gal I差异表达的肾透明细胞癌细胞株,并用流式细胞术检测细胞凋亡水平;q RT-PCR和Western blot检测TNFR1在肾透明细胞癌细胞株中的表达,并分析ST6Gal I和TNFR1表达的相关性,q RT-PCR和Western blot检测在差异表达ST6Gal I的细胞株中TNFR1的表达;在A498细胞中抑制ST6Gal I的同时抑制TNFR1的表达,在Caki-1细胞中过表达ST6Gal I的同时过表达TNFR1,然后检测各组细胞的凋亡水平。结果:1)经免疫组化法结果显示,纳入研究的患者ST6Gal I在癌组织中的表达水平与正常肾脏组织相比明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05);不同肿瘤分期及肿瘤大小(≤7cm和>7cm)、肿瘤分级(中低分化、高分化)的肾透明细胞癌组织中ST6Gal I的表达阳性率间差异有统计学意义(P<0.05);2)与对照组比较,siRNA-ST6Gal I组THP-1细胞中ST6Gal Im RNA和蛋白相对表达量均显著下降(P<0.05);与对照组比较,THP-1细胞经诱导后Arg-1 m RNA表达升高,i NOS m RNA表达下降,CD206表达升高(P<0.05),而转染si RNA-ST6Gal I后进行诱导处理的THP-1细胞Arg-1 m RNA表达下降,i NOS m RNA表达升高(P<0.05);786-O细胞与诱导的THP-1细胞共培养后,培养细胞的存活率明显升高、迁移能力显著增强、凋亡率下降,培养的细胞上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量明显下降,而IL-10、TGF-1含量升高,TIM-1蛋白表达下降,VEGF蛋白表达升高(P<0.05);而786-O细胞与下调ST6Gal I且诱导的THP-1细胞共培养后,细胞存活率下降,迁移能力降低,凋亡率增加降,同时,细胞上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量升高,IL-10、TGF-β1含量下降,TIM-1蛋白表达升高而VEGF蛋白表达下降(P<0.05)。3)ST6Gal I在5中肾透明细胞癌细胞株中的表达均高表达,且在A498细胞中表达最高,在Caki-1细胞中表达最低;抑制A498细胞ST6Gal I后细胞凋亡显著增加,在Caki-1细胞中过表达ST6Gal I后细胞凋亡显著降低;TNFR1在5种肾透明细胞癌细胞株中均表达,其表达与ST6Gal I的表达呈负相关;在抑制ST6Gal I后,TNFR1表达增加,过表达ST6Gal I后,TNFR1表达降低;当在A498细胞中抑制ST6Gal I表达的同时抑制TNFR1表达后,细胞凋亡水平显著低于单独抑制ST6Gal I组,在Caki-1细胞中过表达ST6Gal I的同时过表达TNFR1后,细胞凋亡水平显著高于单独抑制ST6Gal I组。结论:1)ST6Gal I在肾透明细胞癌组织中的表达水平显著高于正常肾脏组织,肿瘤大小>7cm,临床分期为Ⅱ期,肿瘤分级为中低分化的ST6Gal I表达阳性率高。2)下调ST6Gal I表达可抑制THP-1细胞向M2型巨噬细胞极化,进而抑制肾透明细胞癌细胞的生长与迁移,并调控炎症因子与免疫相关蛋白TIM-1、VEGF的表达。3)ST6Gal I可通过抑制TNFR1的表达而抑制肾透明细胞癌细胞的凋亡。
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