目的：子宫颈病变是妇女最常见的疾患之一，其严重的情况是宫颈癌。在妇女癌症中，宫颈癌的发生率仅次于乳腺癌，位居第二。宫颈癌是我国常见的女性恶性肿瘤，通常认为放疗和手术是治疗宫颈癌的有效方法，但有高危因素的病例，如晚期癌、桶状癌、淋巴结转移或小细胞癌，无论手术或放疗均不满意，宫颈肿瘤局部复发及远处转移是治疗失败的主要原因。即使应用现代的放疗设备和根治手术，都很难治愈。随着新的化疗药物不断问世和化疗技术的不断发展，化疗在宫颈癌治疗中的作用日益重要，但多数抗肿瘤药物缺少选择性抑制肿瘤的作用，均在杀伤肿瘤细胞的同时，常伴有不同程度的毒性反应。本研究旨在研究大蒜油、米非司酮(RU486)两种药物及二者与顺铂伍用对人宫颈癌Hela细胞体外生长的影响，以期对临床上药物治疗宫颈癌提供新的思路。 方法： 1．细胞培养：常规方法复苏冻存于液氮罐中的人宫颈癌Hela细胞，接种于含10％胎牛血清RPMI-1640培养液的培养瓶中，置于37℃、5％二氧化碳饱和湿度培养箱内培养，每天观察细胞生长情况，待细胞生长至70％融合时(约2-3天)，EDTA消化，制成单细胞悬液，以备实验用。 2．MTT比色法测定细胞生长抑制情况：调整细胞密度至3×10~4个细胞/ml，充分混匀，接种到96孔培养板中，中文摘要每孔200 pl，置于培养箱内培养，至对数生长期，吸去上清液，米非司酮实验组分别加入200“l新鲜配制的不同浓度的含药培养液，米非司酮终浓度分别为sumol/L、10umol/L、20umol几、4Oumol/L(药物浓度根据临床用药血药浓度和预实验确定)，对照组加入200 pl含等量无水乙醇的培养液，继续培养;大蒜油终浓度分别为12.5 mg几、25mg/L、50 mg几、100 mg/L，对照组加入200 pl培养液。联合组为o.sp创ml顺铂分别与上述浓度的药物合用。每天于显微镜下观察细胞生长情况，分别于24小时、48小时、72小时取出培养板，每孔加入20 pl(浓度为sg/L)MTT，轻振培养板，置培养箱中孵育4小时后，弃去上清液，加入二甲基亚飒200协1，室温震荡8分钟，使其彻底溶解，于酶标仪57Onm波长处测其吸光度A值，计算出抑制率(IR)。同法重复实验3次。抑制率(IR)=(1一实验组A值/对照组A值)x100%。 3.光学显微镜观察细胞形态:调整细胞密度至3 x 104个细胞/ml，接种到预置盖玻片的24孔培养板中，每孔lml。置于培养箱内培养，至对数生长期，更换培养液，加入药物。实验组加入终浓度分别为sumol/L、1 Oumol/L、20umol几、40umol/L的米非司酮，以及终浓度分别为1 2.5m创L、25mg/L、50m留L、100 mg/L的大蒜油，同样设对照组，24小时、48小时、72小时后取出盖玻片，Gimsa染色，光镜下观察细胞形态。 4.透射电镜观察细胞形态:将细胞按照上述浓度接种于培养瓶中，上述浓度药物作用24小时、48小时、72小时后，收集细胞，2.5%戊二醛前固定，清洗后1%饿酸后 2中文摘要固定，常规脱水，浸透，环氧树脂包埋，制成脂块，切成超薄切片，透射电子显微镜观察细胞形态。 5 .TUNEL法检测细胞凋亡:按照光学显微镜观察细胞形态方法获得细胞爬片，置于培养箱内培养，至对数生长期，更换培养液，加入药物。药物浓度同上，设对照组。24小时、48小时、72小时后，按照TUNEL试剂盒说明操作，对细胞爬片进行处理，细胞核染成棕褐色者为凋亡细胞，核蓝色者为阴性。每个视野计数100个细胞，每张片计数3个视野，阳性细胞数占细胞总数的百分率即为凋亡指数(Al)。 结果: 1.四种浓度大蒜油作用于细胞24小时、48小时、72小时细胞生长受到不同程度的抑制，明显高于对照组;各浓度间及各时间抑制率差异显著(P<0.05)。呈剂量、时间依赖性。72小时抑制率分别为38.46%、56.25%、65.32%、76.33%。 2.米非司酮作用于细胞24小时、48小时、72小时细胞生长受到不同程度的抑制，各浓度间及各时间抑制率差异显著(P<0.05)。72小时抑制率分别为36.74%、49.62%、61.96%、71.34%，均呈剂量时间依赖性。 3.0.5、留ml)l项铂与四种浓度大蒜油、米非司酮配伍使用，作用效果均大于三种药物单独应用(P<0.05)。48小时四种浓度的大蒜油与顺铂合用对细胞的抑制率分别为38.37%、51.55%、63.87%、75.21%;而48小时四种浓度的米非司酮与顺铂合用对细胞的抑制率分别为39.43%、47.62%、59.37%、71.49%。一....，‘....，.... 3 中文摘要 4.细胞出现了明显的凋亡现象，光学显微镜、透射电子显微镜均可观察到细胞凋亡的形态学改变;TUNEL法证实了四种浓度大蒜油作用24、48、72小时细胞凋亡率均明显高于对照组(P<0.01)，各浓度间凋亡率比较差异亦有显著意义(P<0.01)。四种浓度米非司酮作用24、48、72小时细胞凋亡率均明显高于对照组(P<0.05)。各浓度间凋亡率比较差异亦有显著意义(P<0.05)。 结论:体外细胞培?