内皮细胞在系统性血管炎的发病机制中起着重要作用。抗内皮细胞抗体(AECA)可识别内皮细胞表面的多种抗原成分，引起免疫反应是导致内皮损伤可能的机制之一。本研究的前期工作中，应用免疫印迹技术研究了AECA在系统性血管炎和其他多中自身免疫病患者血清中的阳性率。在不同系统性血管炎和SLE患者血清中均存在与内皮细胞47kDa分子量抗原相结合的抗体。经蛋白质组学方法分离鉴定其成分为α烯醇化酶。目的：在前期工作的基础上，对蛋白质组学分离和鉴定的AECA相关抗原进行基因重组和表达，检测其相关抗体在血管炎和其他自身免疫性疾病患者血清中的阳性率。 方法：以人胎盘λZAPExpresscDNA文库为模板PCR扩增人enol基因CDS片段，与表达载体重组后，在大肠杆菌中表达和纯化重组的人α烯醇化酶。用质谱鉴定后的重组蛋白作为抗原，用Western杂交和ELISA法分别检测正常人和不同结缔组织患者血清中抗人α烯醇化酶抗体水平。 结果： 1.克隆了人α烯醇化酶基因cDNA片段，将重组的人α烯醇化酶在大肠杆菌中进行原核表达和纯化。 2.质谱鉴定重组蛋白为带有6个组氨酸的重组人α烯醇化酶。 3.用重组蛋白作为抗原，Western杂交检测正常人和不同结缔组织病中抗人α烯醇化酶抗体。 4.ELISA检测抗α烯醇化酶抗体在正常人及各疾病组患者血清中的阳性率分别为系统性血管炎51.6％，SLE41.2％，SS16.7％，RA46.7％，正常人1.7％，与正常人相比，系统性血管炎及其他各疾病组患者血清中该抗体水平明显增高，并具有显著性差异。与WB法检测相比，ELISA检测所得抗α烯醇化酶抗体在各组患者中血清的阳性率有所降低。 结论：本研究是在对大样本多种血管炎和SLE、SS、RA等多种自身免疫性疾病患者血清中AECA检测后的后续工作，进一步证实了α烯醇化酶是AECA识别的自身抗原之一。通过对多种自身免疫性疾病患者血清中抗α烯醇化酶抗体水平的检测发现，PM/DM患者和正常人血清中不存在此抗体，而系统性血管炎和SLE、SS、RA患者血清中均存在不同水平的抗α烯醇化酶抗体，这提示不同系统性血管炎和SLE、SS、RA患者的AECA存在共同的靶抗原。本研究在国内首次在体外证明α烯醇化酶是AECA识别的自身抗体之一，这将进一步促进对自身免疫性疾病中血管损伤机制的理解，为此类疾病的诊断和治疗提供一定的帮助。