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番茄斑萎病毒属(Tospovirus)病毒在世界范围内广泛分布,造成多种作物的巨大经济损失。番茄环纹斑点病毒(Tomatozonate spot virus,TZSV)是近年在云南发现的Tospovirus新种,引起番茄和辣椒叶部环斑、顶芽坏死及果实的黄花或坏死环斑,对其全基因组结构与编码的蛋白进行了比较分析研究,但病毒基因编码的NSm蛋白功能研究尚未展开。为了明确NSm蛋白在病毒侵染、复制及运动过程中的作用,本研究克隆了TZSV中的NSm基因,并将其与绿色荧光蛋白基因GFP连接,构建到植物表达载体pGD上,成功构建了载体pGD-NSm-GFP,以载体pGD-GFP(pGDG)为对照,转化农杆菌C58C1共侵润本生烟。在侵润24-36h后,观察到pGD-NSm-GFP侵润的本生烟叶片细胞中细胞壁上有连续的荧光分布,细胞质中也有少量的荧光亮点,pGD-GFP载体侵润的本生烟叶片细胞中细胞壁上虽然也有部分荧光表达,但呈不连续分布,细胞质中则完全没有荧光蛋白的表达。因载体pGD-NSm-GFP表达的NSm-GFP属于融合蛋白,GFP在细胞中的定位受到NSm蛋白的影响,因此可以初步证明在激光共聚焦显微镜下观察到的pGD-NSm-GFP载体侵染的本生烟叶片细胞中细胞壁上的荧光蛋白表达,是NSm蛋白在病毒运动的过程中的表达区域,细胞质中的荧光表达也说明NSm蛋白在表达的过程中也存在于细胞质中,由此推测NSm蛋白与病毒在细胞内的运动过程中也起作用。
通过对TZSV-NSm蛋白在植物细胞中表达区域的研究,为探讨病毒在细胞内和细胞间的运动是否存在新的途径及其侵染为害机制研究积累基础,并为这类植物病毒的防控提供理论指导。