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组蛋白去乙酰化酶(HDACs)抑制剂,可以通过诱导细胞周期阻滞、分化和凋亡,进而抑制细胞的增殖,目前已广泛应用于临床治疗。研究证实,HDACs与肿瘤细胞的多药耐药性相关联。肿瘤多药耐药性是指肿瘤细胞对某种化疗药物产生了耐药性之后,对其他结构上无关、且作用机制不相同的化疗药物,也产生交叉耐药性,这是临床肿瘤化疗失败的主要原因。曲古抑菌素(TrichostatinA,TSA)属于异羟肟酸类,是HDACs抑制剂的一种。许多研究证实其在抑制肿瘤的发生发展过程中发挥重要作用,但其在肿瘤细胞多药耐药性中发挥何种作用,以及相关的机制,目前还不是很清楚。目的1.探究HDACs抑制剂TSA对乳腺癌药物敏感细胞MCF-7和多药耐药细胞MCF-7/DOX存活率的影响;2.探究HDACs抑制剂TSA对乳腺癌药物敏感细胞MCF-7和多药耐药MCF-7/DOX细胞凋亡的影响;3.探究HDACs抑制剂TSA对乳腺癌药物敏感细胞MCF-7和多药耐药细胞MCF-7/DOX凋亡相关蛋白表达的影响;4.初步探究多药耐药细胞MCF-7/DOX对HDACs抑制剂TSA更为敏感的机制。方法1.采用MTT实验探究HDACs抑制剂曲古抑菌素(TSA)对药物敏感细胞MCF-7以及多药耐药细胞MCF-7/DOX的细胞生存率的影响,2.利用DNAladder实验,检测TSA对MCF-7和MCF-7/DOX细胞凋亡发生的影响。3.MCF-7组和MCF-7/DOX组细胞分别用0nM、50nM和100nMTSA处理72h后,提取全蛋白。采用Western blot检测凋亡标志性蛋白PARP蛋白以及Caspase6的变化。4.Western blot检测在药物敏感细胞MCF-7和多药耐药细胞MCF-7/DOX中H4和H3的乙酰化水平。5.采用实时荧光定量RT-PCR,检测在药物敏感细胞MCF-7以及多药耐药细胞MCF-7/DOX中,H4和H3的基因表达情况。结果MTT实验检测后的结果显示:两株细胞经过TSA在20nM-200nM的浓度下处理72小时之后,MCF-7组细胞的存活率,都显著地高于MCF-7/DOX组,并且在TSA浓度为50nM和100nM时,MCF-7组细胞存活率分别为0.95、0.65,而多药耐药细胞MCF-7/DOX组的细胞存活率仅为0.55、0.40,细胞存活率相差最为显著,且p<0.05。DNA ladder实验观察到的结果显示:与MCF-7组的细胞相比,当TSA浓度为50nM、100nM时,MCF-7/DOX组细胞产生了更为明显的DNA梯带。这一结果表明与MCF-7组相比,TSA诱导多药耐药MCF-7/DOX细胞凋亡的现象更为显著,且在TSA浓度为50nM时,MCF-7/DOX多药耐药细胞中就已经产生了凋亡的现象。Western blot结果显示:当TSA浓度为100 nM时,在药物敏感细胞MCF-7组中存在Caspase6和凋亡标志蛋白PARP的表达,而MCF-7/DOX组在TSA浓度为50 nM时,这两种蛋白就有表达,且这两种蛋白的表达量显著高于MCF-7组。Western blot结果显示:两株细胞中H4和H3的乙酰化水平没有显著差别,p>0.05。实时荧光定量RT-PCR结果显示:两株细胞中H4和H3的基因表达量没有显著差别,p>0.05。结论组蛋白去乙酰化酶(HDACs)抑制剂曲古抑菌素A(TSA)通过激活凋亡标志蛋白Caspase6和PARP,促进多药耐药细胞MCF-7/DOX凋亡,进而抑制其增殖。且与药物敏感细胞MCF-7相比,乳腺癌多药耐药细胞MCF-7/DOX对TSA更为敏感。但MCF-7/DOX对TSA更为敏感的原因并不是H3、H4乙酰化水平的差异。曲古抑菌素A(TSA)或可作为抑制肿瘤细胞多药耐药性的一种有效药物,但其药物作用机制还需进一步明确。