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口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)是偶蹄动物共患的一种急性、热性、高度接触性传染病,传染力极强性,一旦发生,常呈流行性,病情急,传播快,蔓延广。由于其传染性质,疾病暴发经常导致严重地经济损失,而且,对家畜方面的国内和国际贸易产生相当大的冲击。由于口蹄疫的特殊性质,寻求快速、准确的检测及分型方法,对于疾病的控制与研究具有重要意义。1 RT-PCR检测口蹄疫病毒根据已经发表的口蹄疫病毒(FMDV)全基因序列,设计了一对引物,建立RT-PCR方法,检测口蹄疫病毒。引物位置在4011-4030与4413-4432左右。在O、A、AsiaⅠ三个血清型之间基本一致。试验结果表明该方法就有良好的特异性和敏感性。用上述方法同时扩增FMDV以及PRRSV、RV、VSV、TGEV、PEDV六种病毒RNA模板,结果仅FMDV可以得到明显的条带,其他5种对照病毒未见明显杂条带,PCR产物酶切得到了预期大小的条带。方法可以检测到100.67TCID50的病毒量。病料检测结果与国家参考实验室检测结果一致,表明方法可以用来检测FMDV。2多重RT-PCR对口蹄疫病毒分型根据已经发表的口蹄疫病毒(FMDV)全基因序列,设计了一套引物,建立多重RT-PCR方法,区分A型、AsiaⅠ型、O型三种血清型的病毒。方法对O型病毒的敏感性为101.00LD50,对AsiaⅠ型的敏感性为101.25LD50,对A型病毒敏感性为101.00LD50。而且具有良好的特异性,PCR产物测序表明得到了正确的扩增产物。方法能够区分保存适当的病料,结果与国家参考实验室检测结果一致,表明方法可以用于病毒的分型。3新疆样品FMDV持续性感染调查FMDV可以在动物体内建立持续性感染。动物不表现临床症状,但病毒存在于体内。本实验利用两种RT-PCR检测方法对采自新疆的样品进行检测,方法一为兰州兽医研究所检测方法,方法二为论文第一章中的RT-PCR检测方法。采集新疆14地州奶牛场牛O/P液1043份,屠宰羊淋巴结347份,共1390份。检测结果为1390份样品全是阴性。结果表明采自新疆的样品不存在FMDV持续性感染。