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目的:采用网络药理学分析枇杷叶治疗肺癌的靶点基因和相关信号通路,利用回流提取法提取枇杷叶AB-8大孔树脂分离纯化成分制备枇杷叶提取物,并通过Western blot实验和细胞实验研究不同浓度枇杷叶提取物作用肺癌A549细胞和NCI-H292细胞后对抑制素βB（inhibinβB,INHβB）的蛋白表达和细胞侵袭转移能力的影响作用。方法:1、利用TCMSP数据库检索枇杷叶活性成分和靶点基因;Gene Cards数据库、DISEASES数据库和CTD疾病数据库分析肺癌靶点基因;利用Veen在线工具获取枇杷叶治疗肺癌的潜在靶点基因,导入STRING数据库和Cytoscape v3.8.0软件构建蛋白质-蛋白质相互作用（Protein-protein interaction,PPI）网络图和筛选出核心调控基因（Hub基因）;DAVID数据库对共同靶点基因进行基因本体论（Gene Ontology,GO）和京都基因与基因组百科（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG）通路富集分析,使用R语言实现结果可视化。2、利用回流提取法提取枇杷叶,通过AB-8大孔树脂分离纯化枇杷叶提取物三萜酸成分;通过高压液相色谱法测定枇杷叶提取物成分和含量;紫外分光光度计检测和绘制标准曲线获取提取物总三萜酸含量。3、采用CCK-8实验观察不同浓度枇杷叶提取物在24 h、48 h和72 h对肺癌A549细胞和NCI-H292细胞活力的影响作用,获取半数抑制浓度（half maximal inhibitory concentration,IC50）值;Western blot实验检测不同浓度枇杷叶提取物作用肺癌A549细胞和NCI-H292细胞后细胞中INHβB蛋白的表达水平;细胞划痕实验和Transwell实验检测不同浓度枇杷叶提取物对肺癌A549细胞和NCI-H292细胞迁移、侵袭能力的影响。结果:1、TCMSP数据库筛选出18个枇杷叶活性成分和262个靶点基因;Gene Cards数据库、DISEASES数据库和CTD疾病数据库共同获取了2143个肺癌靶点基因;Veen分析显示共有41个枇杷叶治疗肺癌的潜在靶点基因,通过构建PPI网络图发现41个靶点基因之间存在互相作用,通过Cytoscape v3.8.0软件筛选出前10位Hub基因;GO功能富集分析发现枇杷叶治疗肺癌主要影响细胞因子的生物合成、对氧水平的反应、对脂多糖的反应和调节蛋白激酶活性等;KEGG通路富集分析发现枇杷叶治疗肺癌主要影响糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路、T细胞受体信号通路、癌症中PD-L1的表达和PD-1检查点通路、VEGF信号通路、p53信号通路、TGF-β信号通路和MAPK信号通路等。2、回流提取法成功提取枇杷叶三萜酸,AB-8大孔树脂成功对枇杷叶提取物三萜酸成分进行分离纯化,利用高压液相色谱法和标准曲线得到枇杷叶提取物三萜酸中科罗索酸含量为17.69%、齐墩果酸含量为4.56%、熊果酸含量为18.57%,紫外分光光度计测定标准品齐墩果酸相应浓度的吸光度后绘制标曲得到枇杷叶提取物总三萜含量为54.13%。3、（1）CCK-8结果显示,枇杷叶提取物能有效抑制肺癌A549和NCIH292细胞活力,获取A549细胞24 h IC50值为23.14μg/m L、48 h IC50值为20.89μg/m L、72 h IC50值为18.92μg/m L;NCI-H292细胞24 h其IC50值为11.51μg/m L,48 h IC50值为6.54μg/m L,而未获得72 h的IC50值。（2）Western blot实验结果显示,与对照组相比,A549细胞在给药后INHβB的蛋白表达水平显著降低,进行两两分析发现,与12.5μg/m L药物浓度相比,25μg/m L、50μg/m L枇杷叶提取物处理细胞后抑制该蛋白表达的作用增强,且50μg/m L的药物浓度抑制蛋白表达作用更明显。而NCI-H292细胞在枇杷叶提取物作用下INHβB的蛋白表达水平被抑制,但两两药物浓度之间对该蛋白表达的抑制作用不明显。（3）划痕实验结果表明给药24 h,相对于对照组,给药组能不同程度抑制A549细胞迁移,与12.5μg/m L药物浓度相比,25μg/m L、50μg/m L的枇杷叶提取物抑制细胞迁移作用较明显,且50μg/m L抑制A549细胞迁移能力更显著;不同浓度枇杷叶提取物对NCI-H292细胞迁移也有抑制作用,与6.25μg/m L的药物浓度相比,12.5μg/m L和25μg/m L均能抑制该细胞迁移,而两药物浓度之间对NCI-H292细胞的迁移影响作用无明显差别。（4）Transwell实验结果显示,相对于对照组,枇杷叶提取物能抑制A549细胞侵袭作用,与12.5μg/m L药物浓度相比,25μg/m L枇杷叶提取物抑制细胞侵袭作用不明显,而50μg/m L的药物浓度相对于两浓度其抑制侵袭作用显著;而NCI-H292细胞随着枇杷叶提取物浓度的增加其抑制细胞侵袭的能力更加显著,成浓度依赖关系。结论:1、网络药理学分析表明枇杷叶可以通过多个靶点基因和多条信号途径作用于肺癌,影响其生物学功能。2、利用回流提取法提取枇杷叶AB-8大孔树脂分离纯化成功制备枇杷叶提取物。3、枇杷叶提取物能够显著降低肺癌A549细胞和NCI-H292细胞INHβB的蛋白表达水平,有效抑制细胞活力和侵袭转移能力。