【摘 要】
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目的:探讨前列腺素E1(PGE1)对内毒素脂多糖(LPS)诱导的大鼠枯否细胞(Kupffer Cell,KC)分泌炎症细胞因子的影响。观察大鼠枯否细胞在LPS刺激及PGE1作用下炎症细胞因子水平及核
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目的:探讨前列腺素E1(PGE1)对内毒素脂多糖(LPS)诱导的大鼠枯否细胞(Kupffer Cell,KC)分泌炎症细胞因子的影响。观察大鼠枯否细胞在LPS刺激及PGE1作用下炎症细胞因子水平及核因子-kB(NF-kB)的变化,进一步探讨PGE1的抗炎作用及其机制,为临床应用提供新的启示。方法:采用胶原酶原位循环灌注和Nycodez密度梯度离心法分离得到高纯度的大鼠枯否细胞,在过夜培养后冲洗两遍,以4-6x105/ml的细胞浓度,接种于24孔培养板。分离并培养枯否细胞48小时后,分别设立不同浓度PGE1组,确立其对细胞无毒性的剂量范围。向枯否细胞中加入LPS及PGE(1分三种不同浓度),分为对照组、刺激组(LPS 10ng/ml)和PGE1组(LPS+PGE1),刺激原代培养的枯否细胞3小时。观察不同浓度PGE1对大鼠枯否细胞TNF-α(肿瘤坏死因子-α)及IL-6(白细胞介素-6)释放的影响。并观察LPS及PGE1的刺激作用对枯否细胞中NF-kB活性的影响。应用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测TNF-α、放免法(RIA)测定IL-6水平。采用凝胶电泳迁移率实验(EMSA)检测NF-kB活性和EMSA特异性。结果:离体正常大鼠的枯否细胞经过LPS刺激后,NF-kB活性显著增强,上清液中TNF-α及IL-6分泌水平均明显高于对照组(P<0.01);不同浓度组PGE1均能显著降低TNF-α、IL-6的释放水平及NF-kB的活性(P<0.05),且量效关系显著。结论:各种疾病造成急慢性肝损伤时,LPS通过活化NF-kB,进一步启动TNF-α、IL-6等炎症因子大量表达。枯否细胞的过度活化、大量炎症因子的释放、血中高水平的内毒素导致的内毒素血症等,都在发病中起着十分关键的作用。PGE1可以通过下调NF-kB活性,减轻枯否细胞的过度激活,减少TNF-α、IL-6等炎症因子大量表达,降低血中高水平的内毒素等多个环节的调节对机体起到保护作用。
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