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口臭是指呼吸时散发的不良气味,在现代交往频繁的社会,口臭给人们的社交和心理方面带来了影响。口臭形成的原因复杂多样,其中定植在口腔中的微生物在代谢的过程中产生的挥发性硫化物(VSC)、挥发性芳香烃复合物、胺类、有机酸成为导致口臭的主要原因之一。并且口腔微生物群落作为人体微生物群落重要的组成部分与人体健康有着密切的关系,对口腔中与口臭有关的微生物进行探究,有助于人们深入了解这些微生物与口腔健康关系。本实验基于16S rRNA测序结果进行分析,研究对口臭有影响的关键作用菌群,并对与口臭有关的常见微生物进行生物学和碳源利用研究,为深入认识口臭相关微生物提供更多依据。此外还将筛选对口臭相关微生物有抑菌效果的中药及抗生素,测定其抑菌效果,寻求改善口气的物质。[目 的]分析口臭与非口臭人群唾液组成微生物差异,探索与口臭有关常见微生物生物学特性和碳源利用特性,筛选对与口臭相关常见微生物具有抑制效果的中药提取物及抗生素。[方法]通过对唾液样本进行16S rRNA基因测序,并采用生物信息学(多样性分析、物种差异分析、功能预测分析)分析口臭与非口臭人群微生物丰度及功能差异;结合前期研究及文献查阅对与口臭有关的6种常见微生物产酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、具核梭杆菌(Fusobacterium nucleatum)、牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis)、厌氧消化链球菌(Peptostreptococcus anaerobius)、中间普雷沃氏菌(Prevotella intermedia)进行生物学特性研究考察6种微生物生长特性、pH、温度、盐度耐受性;采用Biolog GEN Ⅲ微孔板对与口臭有关的6种常见菌株进行碳源利用测定,从碳源利用角度分析与口臭有关微生物代谢功能,并比较不同种属微生物的碳源代谢能力;最后采用滤纸片法及Biolog GEN Ⅲ板法进行抑菌实验,筛选对与口臭有关微生物具有抑菌作用的中药提取物(西青果、金银花、苏木、甘草、毛冬青、鱼腥草、牛蒡子、乌梅、夏枯草、黄莲、五倍子、三七、石榴皮)及抗生素(利福霉素SV、二甲胺四环素、林可霉素、万古霉素、氨曲南)。[结 果]口臭组和非口臭组的微生物丰度存在差异,其中拟杆菌门(Bacteroidetes)和厚壁菌门(Firmicutes)在口臭组富集,放线菌门(Actinobacteria)和变形菌门(Proteobacteria)在非口臭组人群中富集,并且口臭组及非口臭组人群之间功能也具有差异,87个功能通路中57个在非口臭组人群富集,30个在口臭组人群富集;6种与口臭有关微生物生长过程阶段具有差异,金黄色葡萄球菌、产酸克雷伯氏菌迟缓期不明显,牙龈卟啉单胞菌、厌氧消化链球菌迟缓期较长;对数生长期持续时间大部分为6-8 h,产酸克雷伯氏菌较短为4 h,牙龈卟啉单胞菌较长为12 h;大部分微生物在10-14 h进入稳定期,产酸克雷伯氏菌较快为6 h,牙龈卟啉单胞菌、厌氧消化链球菌较慢。对其适宜的温度、pH、盐度进行研究,表明与口臭有关的6种微生物适宜温度为37℃,适宜pH为7-8,适宜盐度为0.5%-2.5%,金黄色葡萄球菌耐盐性较好适宜盐度为6.5%,温度、pH、盐度的改变都会影响6种微生物的生长;对6种与口臭有关的菌株进行碳源利用分析,表明主要利用的碳源有氨基酸类,并且不同种属的微生物碳源代谢能力不同;通过对口臭有关微生物具有抑菌作用的中药及抗生素进行筛选,发现中药中抑菌作用最强的为夏枯草和牛蒡子,抗生素中抑菌作用最强的为二甲胺四环素和林可霉素。[结 论]口臭组与非口臭组微生物多样性及菌落组成存在差异,在口臭组中微生物群落多样性更加丰富;与口臭有关的微生物可能因为种属的不同导致生物学特性和碳源代谢能力均有一定差异;中药及抗生素对与口臭有关微生物具有一定的抑制作用,具有作为口臭防治用药的潜力。