铁和氨基酸对Pseudomonas sp.ZH-FAD降解双酚F和双酚A的影响

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双酚类化合物属于内分泌干扰物,具有一定的致畸性和胚胎毒性,即使在低浓度下,仍然会影响生物的生殖和发育。考虑到环境介质的丰富性及复杂性,本论文以双酚F(BPF)为模式化合物,研究了外加营养物质及含铁物种对菌株Pseudomonas sp.ZH-FAD降解BPF的影响,并具体分析了外加营养物质氨基酸及含铁物种的作用机理,为提高双酚类化合物的生物降解提供理论基础。研究了外加营养物质对菌株ZH-FAD降解BPF的影响。结果表明,酵母膏、蛋白胨和水解酪蛋白可以促进BPF降解。其中蛋白胨促进效果最佳,BPF降解率可达91%。单个氨基酸中促进效果最佳的是L-丙氨酸,降解率可达92%。通过对菌株ZH-FAD基因组测序、基因功能注释及定量RT-PCR分析,发现在BPF降解3.5 h和5.5 h时,丙氨酸体系中丙氨酸脱氢酶、丙氨酸消旋酶和甘氨酸氧化酶基因的表达量是无丙氨酸体系的2-8.5倍。其中丙氨酸脱氢酶相对表达量最高。这些结果表明这三种酶均参与了BPF降解,且丙氨酸脱氢酶起到主要作用。研究发现,这三种酶的代谢产物是NADH和丙酮酸。NADH作为辅酶因子,能够提高菌株ZH-FAD细胞提取物降解BPF的速率。丙酮酸作为三羧酸循环的重要枢纽,能够促进菌株ZH-FAD生长,提高BPF的降解速率。研究了外加氨基酸和含铁物种对菌株ZH-FAD降解BPF和双酚A(BPA)的影响。结果表明,菌株ZH-FAD可在氨基酸氧化酶作用下产生H2O2。外加苏氨酸可使菌株ZH-FAD产生的H2O2浓度最大达85μmol/L,从而使在H2O2浓度较高的0-2小时,降解BPF的速率高于丙氨酸体系。进一步外加柠檬酸铁,可以促进BPF的降解,最适反应条件为1 mmol/L柠檬酸铁和pH为6。反应过程中检测到了Fe2+和·OH,可见芬顿反应能够发生。研究发现,硫化亚铁能够降解BPF和BPA。将硫化亚铁与菌株ZH-FAD复合时,BPF的降解率大于硫化亚铁及菌株ZH-FAD单独作用,特别是在反应初期。进一步添加柠檬酸盐不仅可以提高硫化亚铁氧化反应,还可以促进生物降解BPF的速率,从而提高硫化亚铁和菌株ZH-FAD复合体系降解BPF的速率。由于菌株ZH-FAD不能降解BPA,当硫化亚铁与菌株ZH-FAD复合时,硫化亚铁与菌株复合体系BPA降解率低于硫化亚铁单独作用,表明菌株ZH-FAD对BPA降解有一定的抑制影响。外加柠檬酸盐可以提高硫化亚铁与菌株ZH-FAD复合体系中BPA的降解率和细胞浓度,但也增加了菌株ZH-FAD对硫化亚铁降解BPA的抑制效果。上述研究表明,适宜的氨基酸和含铁物种能够促进BPF的生物降解。
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