【摘 要】
：
目的:高迁移率族蛋白1（high mobility group box 1 protein,HMGB1）是存在于体内重要的晚期炎症因子。近年来,因发现其参与了脓毒症发生的病理生理过程并发挥重要的致病作用而成为研究热点。脓毒症（sepsis）是ICU十分常见的危重病症,其发病的根本机制尚未完全阐明,肿瘤坏死因子（TNF-α）、白介素-1（IL-1）等是在脓毒症发病中重要的早期炎症介质。但是,临床应用
论文部分内容阅读
目的:高迁移率族蛋白1（high mobility group box 1 protein,HMGB1）是存在于体内重要的晚期炎症因子。近年来,因发现其参与了脓毒症发生的病理生理过程并发挥重要的致病作用而成为研究热点。脓毒症（sepsis）是ICU十分常见的危重病症,其发病的根本机制尚未完全阐明,肿瘤坏死因子（TNF-α）、白介素-1（IL-1）等是在脓毒症发病中重要的早期炎症介质。但是,临床应用TNF-α及IL-1拮抗剂并未取得满意结果。因此本研究旨在探讨能否通过阻断晚期炎症介质HMGB1的下游信号传导通路从而对内皮屏障起保护作用。方法:选取人肺微血管内皮细胞（HPMEC）,将胰酶消化后的HPMEC于培养瓶中传代培养,并随机分成9组:空白对照组（加入等量PBS）、rh HMGB1处理10min组（600 ng/m L）、rh HMGB1处理30min组（600 ng/m L）、rh HMGB1处理1h组（600 ng/m L）、rh HMGB1处理6h组（600 ng/m L）、rh HMGB1处理24h组（600 ng/m L）、rh HMGB1处理24h+RAGE抑制剂（FPS-ZM1）预处理组（600 ng/m L rh HMGB1+FPS-ZM1 0.05μM）、rh HMGB1处理60min+Rock抑制剂（Y-27632）预处理组（600 ng/m L rh HMGB1+Y-27632 10μmol/L）、rh HMGB1处理24h+Rock抑制剂（Y-27632）处理组（600 ng/m L rh HMGB1+Y-27632 10μmol/L）。1、传代培养后的人肺微血管内皮细胞,通过CCK-8增殖实验测定内皮细胞的存活率。2、利用Transwell法检测下层小室的FD40荧光值以反映内皮细胞通透性。3、利用Pull Down法检测HMGB1诱导的Rho-GTP的活性表达。4、利用蛋白免疫印迹（Western blot）法检测Rock、Total Rho A、MLC、p-MLC、ZO-1、VE-cadherin蛋白表达。5、利用免疫荧光法观察F-actin、ZO-1、VE-钙粘蛋白的表达及分布。结果:1、在600 ng/m L的rh HMGB1刺激24h后,与空白对照组相比,内皮细胞存活率无显著变化,且差异无统计学意义（P>0.05）。2、应用浓度为100 ng/m L、200 ng/m L、400 ng/m L、600 ng/m L的rh HMGB1刺激HPMECs 24h,随着HMGB1浓度的增大,内皮屏障通透性也明显升高,差异有统计学意义（P<0.05）;经过600ng/m L的rh HMGB1处理内皮细胞10min、30min、1h后,内皮细胞屏障通透性较空白对照组无明显变化（P>0.05）。而经rh HMGB1处理6h、24h后,与空白对照组相比,内皮细胞屏障通透性显著增加,差异有统计学意义（P<0.05）。3、Pull Down法及蛋白免疫印迹法显示HMGB1诱导Rho蛋白和Rock蛋白快速活化,肌球蛋白轻链在30min时被激活,其磷酸化形式有所上升,1h处磷酸化水平达到最高值,但随着刺激时间的延长磷酸化肌球蛋白逐渐失活。而内皮连接蛋白ZO-1及粘附连接蛋白VE-cadherin在rh HMGB1刺激1h后表达逐渐下调。4、与对照组相比,共聚焦显微镜下显示rh HMGB1处理组可以短时间内引起HPMECs细胞骨架蛋白F-actin结构和分布的改变,随着时间延长ZO-1连接蛋白失去连贯性、分布断裂、荧光强度较对照组有所减弱。VE-cadherin被破坏、相互交联、呈片段分布。5、应用FPS-ZM1和Y-27632预处理可以看到其对HMGB1介导的内皮屏障损伤的保护作用,与对照组相比,表现为细胞通透性明显降低,定量分析表明,MLC的磷酸化水平显著降低,ZO-1和VE-cadherin的蛋白表达显著上调（均P<0.05）,并且由F-actin聚集形成的应力纤维减少,ZO-1和VE-cadherin荧光表达明显增强,膜定位明显增加;而在rh HMGB1刺激24h的最后4小时内加入Y-27632,可以发现其并未对内皮屏障损伤起保护作用,与rh HMGB1刺激组相比,细胞通透性无明显差异,ZO-1和VE-cadherin的表达及分布仍处于较低水平。结论:HMGB1与胞外RAGE受体结合后,通过早期活化Rho/ROCK信号通路,诱导MLC磷酸化、F-actin形成应力纤维、内皮连接蛋白分布及表达变化,导致内皮细胞收缩、细胞间形成裂隙,从而使内皮屏障通透性增高。
其他文献
目的:卒中后认知障碍是指卒中后发生的认知功能下降。本研究旨在观察首发缺血性脑卒中这一临床事件后患者认知水平的动态变化,分析首发缺血性卒中后患者认知障碍的相关影响因素,并通过较全面的神经心理学测试研究首发缺血性卒中这一临床事件发生后对各认知域的影响。研究方法:选取2018年12月至2020年09月在辽宁省人民医院因急性首发卒中住院治疗的152名患者,分别于卒中后2周内（基线时）、3个月分别行蒙特利尔
目的:探讨分析急性脑梗死患者发病4.5小时内并使用重组组织型纤溶酶原激活剂（rtPA）静脉溶栓前中性粒细胞与淋巴细胞比值（Neutrophil to lymphocyte ratio,NLR）、红细胞分布宽度（RDW）及超敏C反应蛋白（hs-CRP）的水平与急性脑梗死患者静脉溶栓预后的相关性分析。研究方法:选择并收集了2019年1月至2019年12月在沈阳市第一人民医院神经内科收治的发病4.5小时
目的:本研究通过对比双水平气道正压无创通气与鼻氧管吸氧两种不同呼吸支持方式对急性心源性肺水肿患者的治疗有效率以及反映呼吸与心脏功能状态的指标的改善程度,旨在探究双水平气道正压无创通气对纠正急性心源性肺水肿患者衰竭的呼吸功能和心脏功能是否有效以及在临床中的实用价值。研究方法:本研究回顾性总结与分析2018年11月到2021年1月辽宁省人民医院急诊科收治的51例急性心源性肺水肿患者的临床资料。根据患者
发展农业全产业链是推进我国供给侧结构性改革的关键步骤，为农业农村发展注入了一针“强心剂”，进一步给农业经济发展带来活力。文章根据我国农业全产业链发展现状，结合涉农企业发展新态势，客观分析了我国农业全产业链发展过程中存在的资金筹集困难、经营风险多发以及品牌效应不强等制约因素，并基于此，从利用信息技术资源、优化产业经营环境、龙头企业带动发展、延伸特色产业体系等方面提出建议。
目的:闭合性胸外伤心肌挫伤危险因素分析及与心肌梗死的鉴别。研究方法:收集2019年1月1日至2020年6月30日我院急诊科就诊闭合性胸外伤患者及急性心肌梗死患者入院后前三天肌钙蛋白I（cardiac troponin I,c Tn I）水平、心脏超声及肺CT结果等临床资料。心肌挫伤组纳入标准:（1）有闭合性胸部外伤史;（2）18周岁及以上且无全身系统性疾病;（3）无血流动力学障碍;（4）无心脏大血
目的:研究雷帕霉素通过阻断m TOR信号通路对脓毒症大鼠急性肾损伤的保护作用。方法:随机将90只大鼠平均分组为盐水对照组、脓毒症组以及雷帕霉素组,通过大鼠尾静脉将经生理盐水稀释的脂多糖（5mg/kg）注射注入体内,以此来制作制备脓毒症模型;再经大鼠的尾静脉将经生理盐水稀释的雷帕霉素（2mg/kg）注入大鼠体内进行干预。每组在6小时、12小时、24小时、72小时、120小时分别选取大鼠采集检测指标。
目的:探讨联合血管闭塞试验（vascular occlusion test,VOT）的组织氧饱和度（tissue oxygen saturation,StO2）各参数的变化是否能对脓毒症病情严重程度及预后进行评估方法:选取的研究对象为2019年4月至2020年10月中国医科大学附属第一医院急诊科收治的脓毒症患者,收集研究对象的年龄、性别、感染部位、乳酸（lactate,Lac）值、动脉氧饱和度（a
目的:VEGFR-2作为VEGF的重要受体,被VEGF激活后,能启动下游信号转导,调节内皮细胞的增殖、迁移和体内血管生成。研究发现,在多种恶性肿瘤细胞中VEGFR-2高度表达,VEGFR-2的抑制会导致肿瘤组织中血管生成受到抑制,进而导致肿瘤细胞死亡。因此,VEGFR-2一直是肿瘤药物研发的重要靶点。开发结构新颖,低毒副作用以及高选择性的VEGFR-2抑制剂在肿瘤治疗过程中具有重要意义。研究方法:
目的:探讨不同危险因素与静脉溶栓后早期神经功能恶化的相关性。方法:连续收集2019年7月1日至2020年9月30日在中国医科大学附属第一医院接受静脉溶栓治疗并在神经内科住院的缺血性脑卒中患者的一般资料,影像学资料以及实验室数据进行分析。采用美国国立卫生研究院卒中量表（National Institute of Health stroke scale,NIHSS）评估研究对象神经功能缺损情况以及早期
目的:探索百草枯（paraquat,PQ）中毒所致的肺损伤的相关分子机制。方法:6至8周龄的C57BL/6雄性小鼠按照完全随机化的方法分为四组,实验组（共三组,每组九只）的小鼠即PQ2d组、PQ7d组、PQ14d组,一次性经腹腔注射40mg/kg百草枯建造百草枯中毒模型,对照组（共一组,九只）的小鼠即control组,与实验组同样处理,一次性经腹腔注射同等剂量的生理盐水。百草枯注射后2 d、7 d