博尔纳病病毒感染与DNA依赖蛋白激酶的相关性研究

来源 :哈尔滨医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sotfft
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:通过对博尔纳病病毒在体内对重症联合免疫缺陷鼠的感染性、体外对DNA依赖蛋白激酶缺陷细胞的感染性的研究,以及对相关细胞因子在体内外变化情况的分析,阐明DNA依赖蛋白激酶对BDV感染及增殖的影响。   方法:体内实验中,我们选择Wistar大鼠、裸大鼠(Nude Rat,RNU)、BALB/e小鼠、BALB/c裸小鼠(BALB/c-nu)和重症联合免疫缺陷小鼠(SCID)进行BDV脑内接种感染实验和BDV持续感染人少突胶质瘤细胞(OL/BDV)脑内接种实验,4周后通过免疫组化和原位杂交的方法检测BDV的感染和增殖的情况;同时检测实验动物血清中细胞因子的变化。体外实验中,我们设计了DNA依赖蛋白激酶shRNA干扰表达载体pGPU6-PKcsi和阴性对照质粒pGPU6-NCi,并分别转染人少突胶质瘤细胞(OL),建立稳定的RNA干扰细胞系OL PKesi和对照细胞系OL Nci,用BDV感染该细胞系并通过免疫荧光和免疫印记的方法检测BDV的感染和增殖的情况;并应用酶联免疫吸附法和荧光定量PCR的方法检测细胞因子的变化。同时选用DNA依赖蛋白激酶缺陷的M059J细胞和对照细胞M059K作为研究对照。   结果:BDV脑内接种动物中,Wistar大鼠、裸大鼠、BALB/c小鼠、BALB/c裸小鼠都可以在动物脑组织中检测到BDV的复制,但是SCID小鼠脑内未检测到BDV的核酸与蛋白。用OL/BDV细胞直接脑内接种的实验动物中,Wistar大鼠、裸大鼠、BALB/c小鼠、BALB/c裸小鼠的脑内可以检测到OL/BDV细胞成瘤性生长,瘤体内和脑组织中都可以检测到BDV抗原。SCID小鼠脑内OL/BDV细胞瘤体较大,其中有BDV增殖,但瘤体周围及其它部位脑组织中未检测到BDV。进而发现在BDV接种后BALB/c裸小鼠和SCID小鼠血清中可以检测到IFN-α表达增加,但是SCID小鼠血清中IFN-a的表达早于BALB/c裸小鼠。BDV体外感染实验显示,BDV可以感染DNA依赖蛋白激酶低表达的RNA干扰细胞系OL PKcsi,但是BDV复制过程受到明显的抑制。通过进一步检测OL PKcsi细胞系中细胞因子水平检测发现,当DNA-PKcs基因表达下调时,细胞中IFN-α水平呈上调的趋势。但BDV感染OL PKcsi后可以抑制了IFN-α的表达。热休克蛋白HSP70、HSC70和HSP105的mRNA水平在OL PKcsi细胞中也有上调。另外,在DNA-PK缺陷的M059J细胞中白细胞介素(IL)6和8也有上调。   结论:BDV可以感染裸大鼠(RNU)和裸小鼠(BLAB/c-nu),但是不能感染DNA-PK缺陷的SCID小鼠。通过RNAi技术下调OL细胞DNA-PKcs基因表达,不影响BDV侵入OL细胞,但抑制BDV在细胞内的复制过程。IFN等细胞因子上调参与了DNA-PK缺陷导致的BDV增殖抑制过程。
其他文献
本文提出了一类基于计算力矩结构的变增益鲁棒控制策略,用于参数不确定性机器人的轨迹跟踪.其特点是利用了机器人动力学的一种特殊的参数变量分离方法,只需知道一个集中的系统不
对五坐标曲面加工中由离散线性运动逼近理想刀具轨迹所引起的理论加工误差进行了较严格的分析。基于五维线性包络运动分析,得出了适用于多种类型刀具的加工误差估计的通用表达
目的:星形细胞上调基因1(AEG-1)是新近发现的由人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)感染或肿瘤坏死因子-α诱导的人原代胎儿星形细胞所上调的癌基因,与许多肿瘤的发生,演进和转移相关,然
妊娠发生过程中,蜕膜是母体与胚胎直接接触的部位,早孕期蜕膜的血管生成和血管重塑与维持胚胎着床和早期胎盘发育密切相关,也是子宫内膜蜕膜化的一个重要变化。但参与调节的
目的:   探讨成年人系统性EB病毒阳性T/NK细胞淋巴组织增殖性疾病(ASEBV+T/NK—LPD)的临床病理特征、免疫表型和EBV感染特征,以提高对其的认识及诊断水平。   材料与方
本文简要介绍任务+场景式教学法及其现实应用基础,论述任务+场景式教学法在中职英语教学中的应用策略,以任务的形式训练学生运用英语进行交流,让学生用英语完成各种场景中真
目的:动态监测习惯性流产患者再妊娠过程中外周血CD4+CD25+CD127dim/-调节性T细胞(Treg)与人类白细胞抗原G(HLA-G)的表达随妊娠过程的动态变化情况,为Treg及HLA-G能否作为妊娠监测
目的:探究HGF及其受体C-Met在大肠癌淋巴管生成和淋巴道转移中的作用,及其可能的作用途径,为临床预测和治疗大肠癌淋巴道转移寻找治疗的靶点。   方法:收集哈尔滨医科大学
目的:研究外源性硫化氢(Hydrogen sulfide,H2S)对胃癌细胞迁移和侵袭中的作用,为胃癌的治疗和抗癌药物的研发提供新思路。   方法:胃癌细胞常规培养,对其施加不同浓度的硫氢化
研究目的:   1、观察人类同种异体小肠移植术后肠粘膜活检组织的病理形态改变,寻找其变化规律。   2、研究CD4+和CD8+淋巴细胞在小肠移植术后肠粘膜组织中的动态变化及对