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目的：观察三种B族维生素对坐骨神经慢性结扎损伤模型(CCI)大鼠神经病理性疼痛行为及脊髓背角和背根节p-ERK表达的影响，监测CCI大鼠血液B族维生素浓度，观察给予维生素B(VitB)治疗时血药浓度与大鼠痛行为之间的关系，进一步探讨VitB镇痛作用机制。
方法：采用CCI模型。雄性SD大鼠156只，随机分为6组。对照组(Con)：不接受任何手术操作；假手术组(Sham)：只分离坐骨神经；CCⅠ组(CCI)：结扎坐骨神经；维生素组(B1、B6、B12)：坐骨神经结扎后分别腹腔注射B133mg/kg/d、B633mg/kg/d、B120.5mg/kg/d，连续14天。并分别进行：①行为学实验(n=6)：于术前2天、术后1、3、5、7、10、14天测定动物热缩足反射潜伏期(TWL)、机械缩足反射阈值(MWT)；②免疫组织化学染色(n=6)：在术后3、7、14天急性处死动物，用免疫组织化学方法观察各组大鼠背根节和脊髓背角p-ERK变化情况。③免疫印迹(n=4)：在术后3、7、14天用免疫印迹(westernblot)方法检测各组背根节和脊髓背角磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)变化情况。④于术后3、7、14天测定各组大鼠血液B6，B12浓度。
结果：
1.各组TWL、MWT的变化：各组TWL、MWT基础值无差别。Sham组TWL、MWT术后各天与Con组比较无差别。CCⅠ组与Sham组比较术后各天TWL、MWT明显降低(P＜0.01)。给药组术后TWL、MWT于第1天开始降低，于第5天达高峰，其后逐渐不同程度恢复。与CCⅠ组比较，B1组术后5、14天TWL提高(P＜0.05)；B6组术后3、5、7、10、14天TWL提高(P＜0.05);B12组术后1、5、7、10、14天TWL提高(P＜0.05)。术后5天各维生素组TWL无差别，术后14天B1组TWL低于B6、B12组(P＜0.01)；术后3、5、7、14天B12组TWL与B6组无差别(P＞0.05)，术后1、10天B12组TWL高于B6组(P＜0.01)。各维生素组术后各天MWT与CCⅠ组无明显差别。
2.各组血浆B6的变化：Sham组术后3、7、14天血浆B6浓度与Con组无差别(P＞0.05)；CCⅠ组术后3、7天血浆B6浓度与Sham组无差别，术后14天血浆B6浓度低于Sham组(P＜0.05)；B6组术后3天血浆B6浓度与Sham组无差别(P＞0.05)，术后7、14天高于其它组(P＜0.05)。
3.各组血清B12的变化：Sham组术后3、7、14天血清B12浓度与Con组无差别(P＞0.05)；CCⅠ组术后3天血清B12浓度低于Sham组、Con组(P＜0.05)：B12组术后3天血清B12浓度与Sham组无差别，术后7、14天高于Con组、Sham组、CCⅠ组3、7、14天血浆B6浓度(P＜0.01)。
4.各组背根节及脊髓p-ERK阳性细胞率：Sham组和Con组L4，5背根节p-ERK阳性细胞率(p-ERK阳性神经元占总神经元数的百分比)无差别(P＞0.05)，术后3、7、14天CCⅠ组结扎侧L4，5背根节p-ERK阳性细胞率明显高于Sham组(P＜0.01)，腹腔注射维生素B1、B6、B12明显抑制CCI诱导的L4，5背根节p.ERK表达。p-ERK阳性细胞主要分布于脊髓背角浅层，CCⅠ组背角浅层p-ERK阳性细胞数于术后3、7天明显多于Con组(P＜0.01)，腹腔注射B1、B6、B12明显抑制CCI诱导的脊髓背角浅层p-ERK的表达。
5.各组背根节及脊髓p-ERK含量：免疫印迹法运用p-ERK条带与对应内参tublin条带光密度的比值进行p-ERK表达的半定量分析。Sham组L4，5背根节有低水平的p_ERK表达；术后3、7、14天CCⅠ组p-ERE的表达比Sham组明显增多；术后3天B1、B6和B12组p-ERK表达低于CCⅠ组(P＜0.01)；术后7天B1p-ERK表达低于CCⅠ组(P＜0.01)；术后14天B6组和B12组p-ERK表达低于CCⅠ组(P＜0.01)。CCⅠ组脊髓背角p-ERK表达也明显增多，Sham组脊髓背角有低水平的p-ERK表达；腹腔注射VitB明显抑制CCI诱导的p-ERK表达，术后3天B1(P＜0.01)和B6(P＜0.05)组p-ERK表达低于CCⅠ组；术后7天B12组p-ERK表达低于CCⅠ组(P＜0.01)；术后14天B6组(P＜0.05)和B12组(P＜0.01)p-ERK表达低于CCⅠ组。
结论：
(1)腹腔注射B133mg/kg、B633mg/kg、B120.5mg/kg减轻CCI大鼠热痛觉过敏，B6、B12疗效较好，B1只有微弱的抗伤害性感受效应，三种维生素对机械痛觉过敏和正常痛觉无效。
(2)CCI大鼠B6、B12缺乏，改善其缺乏参与B6、B12镇痛作用机制。(3)背根节和脊髓背角ERK活化参与神经病理性疼痛的信号转导过程，B1、B6、B12可能通过抑制ERK激活发挥镇痛作用。