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前言:肿瘤是常见复杂疾病之一，肿瘤发生发展需要多因素参与并且经历多阶段演变。生物学标记物在肿瘤早期诊断、治疗以及预后判定等方面起重要作用。非编码小RNA（microRNAs，miRNAs）是极具潜力的肿瘤生物学标记物。 miR-590基因位于7q11.23，参与肿瘤、心血管疾病和登革热等许多疾病的发生和发展。在肿瘤中，miR-590-3p能够抑制多形性成胶质细胞瘤迁移、侵袭和上皮-间充质转化。miR-590-3p和miR-590-5p均可促进肝癌细胞增殖。然而，miR-590是否参与喉癌的发生和发展尚未见报道。 在前期工作中，我们发现MYCT1在喉癌中发挥抑癌基因作用，但其上下游调控机制尚不清楚。通过TargetScan等生物学软件预测，我们发现MYCT1是miR-590的潜在靶基因之一。本研究中，我们拟通过相关分子生物学技术检测miR-590在喉癌组织中表达水平及其在喉癌细胞中的生物学功能，同时，鉴定miR-590的靶基因MYCT1，探讨miR-590是否通过靶向MYCT1在喉癌中发挥其生物学功能，为miR-590作为喉癌诊治和预后判定生物学靶标的深入研究提供科学依据。 材料与方法: 一、实验材料 1、细胞系:人喉鳞状细胞癌Hep2细胞系、人胚肾HEK293细胞系。 2、组织标本:收集由解放军463医院耳鼻喉科提供的2013年1月至2014年7月新鲜喉癌及癌旁正常组织标本33例（男25例，女8例，年龄33-82岁，其中伴淋巴转移15例），术后立即置-80℃冰箱保存。所有标本均经过病理学检查及确诊，并经学校医学伦理委员会批准，同时，获得患者知情同意。 二、实验方法 1、细胞培养 2、基因瞬时转染实验 3、Real-time RT-PCR检测 4、Western blot检测 5、CCK8检测和克隆形成实验 6、Transwell小室检测法 7、流式细胞术检测 8、荧光素酶双报告基因活性检测 9、统计分析 实验结果: 1、Real-time PCR结果显示，miR-590在喉癌组织中表达水平较癌旁组织显著增高(P＜0.05);此外，miR-590在淋巴结转移患者的喉癌组织中表达水平较无淋巴结转移患者的喉癌组织中显著增高(P＜0.05)，提示miR-590参与喉癌的发生和发展。 2、在喉癌组织中，MYCT1 mRNA和蛋白表达水平均显著低于癌旁组织;miR-590表达水平与MYCT1蛋白表达水平呈负性相关关系，差异具有显著性（P＜0.05），而与其mRNA的表达水平无显著相关(P＞0.05)，提示miR-590在转录后水平调控MYCT1的表达。 3、TargetScan和PicTar等软件预测结果显示，在MYCT1的3-UTR区存在miR-590结合位点，提示MYCT1可能是miR-590潜在靶基因之一。 4、Real-time PCR和Western blot结果显示，miR-590 mimics转染的Hep2细胞中MYCT1蛋白表达水平显著低于对照组（P＜0.05）;miR-590 inhibitor转染的Hep2细胞中MYCT1蛋白表达水平显著高于对照组(P＜0.05)，而相应mRNA的表达水平无显著差异（P＞0.05）。 5、荧光素酶双报告基因活性检测结果显示，Lut-MYCT1-Wt+miR-590 mimics共转染HEK293细胞组报告基因活性较对照组显著降低(P＜0.05)，证实MYCT1是miR-590的靶基因。 6、CCK8和克隆形成实验结果表明，miR-590 mimics转染组中Hep2细胞的增殖能力及克隆形成数目均较对照组显著增加（P＜0.05）;miR-590 inhibitor转染组中Hep2细胞增殖能力及克隆形成数目均较对照组显著降低(P＜0.05)，提示miR-590促进Hep2细胞的增殖。 7、流式细胞术凋亡检测结果表明，miR-590 inhibitor转染组中Hep2细胞的早期凋亡率较对照组显著升高(P＜0.05);转染miR-590 mimics后，Hep2细胞的早期凋亡率较对照组显著下降(P＜0.05)，提示miR-590抑制Hep2细胞的凋亡。 8、Transwell小室检测法结果表明，miR-590 mimics转染组中Hep2细胞的迁移能力较对照组显著增强(P＜0.05);miR-590 inhibitor转染组中Hep2细胞的迁移能力较对照组显著降低(P＜0.05)，提示miR-590促进Hep2细胞的迁移。 9、流式细胞术细胞周期检测结果表明，转染miR-590 mimics和miR-590inhibitor后Hep2细胞周期无显著变化(P＞0.05）。 10、荧光显微镜检测结果显示，转染绿色荧光蛋白标记的MYCT1 siRNA和过表达MYCT1质粒6h后，在绝大多数Hep2细胞中检测出绿色荧光，证实基因转染实验成功。 11、CCK8和克隆形成实验结果表明， siMYCT1转染的Hep2细胞增殖能力及克隆形成数目与对照组相比显著升高（P＜0.05），而过表达MYCT1的Hep2细胞增殖能力及克隆形成数目与对照组相比显著降低(P＜0.05)，提示MYCT1抑制Hep2细胞的增殖。 12、Transwell小室检测法结果表明，siMYCT1转染组中Hep2细胞的迁移能力较对照组显著增强(P＜0.05)，过表达MYCT1组中Hep2细胞的迁移能力较对照组显著降低（P＜0.05），提示MYCT1抑制Hep2细胞的迁移。 13、流式细胞术检测结果表明，siMYCT1转染组Hep2细胞早期凋亡率与对照组相比显著降低(P＜0.05)，过表达MYCT1组中Hep2细胞早期凋亡率与对照组相比显著增高(P＜0.05)，提示MYCT1促进Hep2细胞早期凋亡。 结论: 1、miR-590参与喉癌的发生和发展。 2、MYCT1是miR-590的靶基因之一。 3、miR-590通过靶向MYCT1促进喉癌细胞增殖、迁移，抑制喉癌细胞凋亡，从而发挥潜在癌基因作用。