骨髓间质干细胞创面移植促进深层皮肤组织损伤再生

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目的:明确瘢痕愈合/再生修复与皮肤损伤深度之间的关系;研究骨髓间质干细胞创面局部移植能否使更深层次的组织损伤再生修复,以及相关的细胞、分子机制。方法:在SD大鼠背部建立连续性、渐进性加深创面,取生长状态良好的第三代SD大鼠BM-MSCs/GFP,以PBS稀释成1.0×10~6/300.0μL的细胞悬液,其中,200.0μL均匀注射于创缘皮内,100.0μL注射于创面浅层,对照组以相同方法注射同等剂量的PBS液,于移植后第1、3、5、7、14、21天照相后取材,行快速冰冻组织病理切片,观察BM-MSCs/GFP移植后不同时间点在创面的数量、分布情况;行HE、Masson染色,确定创面再生的最深组织层次,并根据免疫组织化学染色,观察Blimp1~+、Lgr6~+干细胞在创面的数量和VEGF的表达差异,初步探讨相关的细胞分子机制。实验数据用x±s表示,各时间点创面收缩率、创面愈合率、创面BM-MSCs/GFP计数和免疫组化阳性着色细胞比例用SPSS 13.0统计分析软件两因素方差分析;毛细血管计数用Dunnet t检验;创面再生组织层次用Χ~2检验进行统计学处理;P<0.05为差异有统计学意义。结果:1、对照组毛囊漏斗顶部以上平面的组织损伤再生修复;BM-MSCs/GFP创面局部移植后组织再生层次加深至毛囊皮脂腺开口平面以上。2、BM-MSCs/GFP移植后随时间延长而减少,移植后21日,细胞数量约为移植后首日的1.0%。3、BM-MSCs/GFP创面局部移植后随时间延长向创面深层迁徙,皮脂腺、血管壁等部位早期有散在分布,21日后消失。4、Blimp1~+、Lgr~6+干细胞在移植后第3、5日分别增加,BM-MSCs/GFP组显著高于对照组(P<0.05),至移植后21日两组无明显差异。5、VEGF表达量在BM-MSCs/GFP移植后第1日开始上升,第5日达到高峰,14日开始下降,BM-MSCs/GFP组表达量显著高于对照组(P<0.05)。6、BM-MSCs/GFP治疗组每高倍视野毛细血管数为5.0±0.3,高于对照组的2.5±0.2(P<0.05)。结论:1、BM-MSCs/GFP创面局部移植能使组织再生层次由对照组的毛囊漏斗顶部以上平面,加深到毛囊皮脂腺开口平面以上;2、尽管BM-MSCs/GFP移植后长期存活率低,但移植早期的存活有利于自身Blimp1~+、Lgr6~+干细胞的活化和损伤后皮脂腺的修复;3、BM-MSCs/GFP组再生深度的增加是移植干细胞和自身干细胞共同作用的结果。
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