选题依据:柴胡-白芍药对是中医用药中常见的药对,可缓解肝郁气滞、调节情志,是多个古代经典名方如《太平惠明和剂局方》逍遥散、《伤寒论》四逆散、《景岳全书》柴胡舒肝散等的常用药物,在复方中柴胡作为君药,白芍为臣药。从药物疗效讲,柴胡轻清辛散,疏肝解郁;白芍酸寒收敛,滋阴养血,从归经理论讲,二者共同归于肝经,同时也是目前临床中常用药对^[1]。中药的传统合煎配伍与现代中药提取颗粒合并配伍是常见的两种中药配伍使用形式。目前,对于柴胡、白芍药对配伍的研究主要围绕药对整体的药效及二者合煎配伍后体外成分的变化展开,但关于二者配伍前后体内吸收成分含量会产生怎样的变化?其配伍增效的物质基础是什么?合煎和合并不同的配伍方式会对药对体内成分产生怎样的影响?以上问题尚不明确。针对上述问题,本研究首先对柴胡-白芍药对的体内入血成分轮廓进行研究,其次通过设立柴胡-白芍药对合煎配伍组与合并配伍组来分别探究柴胡、白芍经不同的配伍方式后与其单独使用体内成分有何差异以及两种配伍方式对两味中药体内成分有何影响展开研究,这对于揭示二者配伍的科学内涵,明确二者配伍协同增效的物质基础,及指导临床用药具有重要意义。目的:（1）对柴胡-白芍药对的体内入血吸收成分（包括原型成分及其代谢产物）进行分析,明确柴胡-白芍药对在体内的入血成分轮廓。（2）对柴胡、白芍合并配伍与合煎配伍前后各自体内成分整体差异以及不同配伍方式对柴胡、白芍体内成分会产生怎样的影响进行研究,从体内物质基础角度揭示二者的配伍内涵。方法:（1）建立采用UPLC-QE-Orbitrap-MS技术研究柴胡-白芍药对整体入血成分的分析方法。（2）采用UPLC-QE-Orbitrap-MS技术全面分析柴胡-白芍药对体内入血的原型成分及原型成分代谢物。（3）采用质谱技术中的背景扣除法（BSA）,将单味药含药血清扣除空白血清以及不同配伍方式后的药对含药血清扣除另一味药含药血清,分别得到药对中某一味药配伍前及不同配伍方式配伍后的的入血成分及其代谢物。（4）将代谢组学分析整体差异成分的思想与多元统计方法相结合,全面分析柴胡、白芍经不同方式配伍前后体内成分整体差异及含量变化。（5）比较不同配伍方式中两味药配伍使用对其中一种药味体内成分的影响的异同。结果:（1）柴胡-白芍药对体内研究方法筛选结果:最终确定60g/kg（柴胡、白芍1:1,以生药量计）为药对给药剂量,单味药对应的给药剂量为30g/kg（以生药量计）。每天给药2次,连续给药三天后在15min、30min、45min、60min、120min、180min经眼眶取血,分别取各采血点200μL血清样品并混合,经甲醇沉淀处理后进样。（2）柴胡-白芍药对体内入血成分分析:鉴定原型成分16个,相关代谢产物39个。结果显示,柴胡-白芍药对入血成分主要有柴胡皂苷类及单萜苷类成分,在体内发生的生物转化主要包括氧化、还原、开环、甲基化、脱羟基、脱羧、葡萄糖醛酸化、硫酸酯化等体内反应。（3）柴胡配伍前后入血成分整体差异分析:从配伍前后差异成分种类来看,与单独使用柴胡相比,合并配伍可使其12种入血成分发生变化;合煎配伍可使其10种入血成分发生变化。其中,两种配伍方式均可使柴胡中原型成分柴胡皂苷a、d、b₂入血含量降低,而柴胡皂苷c只在合并配伍中含量降低;两种配伍方式均可使柴胡原型成分代谢物Hydroxy-saikogenin F、Trihydroxyl-saikogenin E含量升高,柴胡皂苷次级苷元前柴胡皂苷F、D、G、Dihydroxyl-dehydrogenation-saikogenin E、Hydroxyl-dehydrogenation-saikogenin F、Hydroxy-saikogenin E仅在合煎配伍中含量升高,而柴胡皂苷元F、D、G、Dihydroxyl-dehydrogenation-saikogenin F、Trihydroxyl-dehydrogenation-saikogenin E仅在合并配伍中含量升高。从配伍前后差异成分含量变化程度来看,合煎配伍中柴胡原型成分柴胡皂苷a、d、b₂含量降低程度大于合并配伍,而合煎配伍中原型成分代谢物Hydroxy-saikogenin F、Trihydroxyl-saikogenin E含量增加程度大于合并配伍。（4）白芍配伍前后入血成分整体差异分析:从配伍前后差异成分种类来看,与单独使用白芍相比,合并配伍可使其22种入血成分发生变化;合煎配伍可使其14种入血成分发生变化。其中,两种配伍方式均可使白芍中原型成分去苯甲酰芍药苷、Glucopyranosyl-lactinolide、没食子酸甲酯、氧化芍药苷、芍药苷入血含量升高,而Glucopyranosyl-paeonisuffrone、芍药内酯苷、二甲基鞣花酸只在合煎配伍中含量升高,Mudanpioside F只在合并配伍中含量升高。两种配伍方式均可使白芍原型成分代谢物Pyrogallol glucuronid、Pyrogallol sulfate含量升高;使原型成分代谢物Protocatechuic acid-4-O-sulfate、Methylgallic acid、3,4-Di-O-methyl gallic acid sulfate、Paeonimetabolin I、Paeonimetabolin I glucuronide isomer含量降低。Methylcatechin-5-O-glucuronide、3-Hydroxy-methoxyl phenylpropionic acid sulfate、Methylgallic acid glucuronide、Methylgallic acid sulfate、Methylpyrogallol sulfate、Methylpyrogallol-glucuronid、C₁₀H₁₈O₄ glucuronide仅在合煎配伍中含量升高,而Paeonimetabolin II仅在合并配伍中含量升高。从配伍前后差异成分含量变化程度来看,合煎配伍中白芍原型成分去苯甲酰芍药苷、Glucopyranosyl-lactinolide、没食子酸甲酯、氧化芍药苷、芍药苷含量增加程度大于合并配伍,而合煎配伍中原型成分代谢物Methylgallic acid、3,4-Di-O-methyl gallic acid sulfate含量减少程度大于合并配伍。结论:本研究从药对配伍前后的体内入血成分入手,首先确定药对的体内研究方法,并进一步对柴胡、白芍配伍前后入血成分差异及含量变化进行全面分析,共鉴定出16个原型成分、39个相关代谢产物,明确了柴胡-白芍药对的体内物质基础。对柴胡、白芍配伍前后各自体内成分整体差异的研究表明,柴胡与白芍相互配伍后可显著减少柴胡中原型成分在血清中含量,增加皂苷类代谢产物在血清中的含量;显著增加白芍中主要原型成分在血清中的含量。由此可知柴胡与白芍相互配伍增效的体内物质基础是由于配伍促进了柴胡中皂苷类原型成分在体内的转化代谢,同时促进了白芍中主要原型成分在体内的吸收。另一方面两种不同的配伍方式显示,合煎配伍相比于合并配伍,可促进柴胡中更多的原型成分转化以及增加代谢产物的含量;可促进白芍中更多的原型成分吸收入血以及增加原型成分在血清中的含量。推测是由于合煎配伍兼具体外配伍与体内配伍两方面,可同时影响药对配伍过程中原型成分在体外的煎煮与体内吸收入血两个过程,使药对配伍后增效。本课题研究结果证明即使两味药单煎后合并配伍使用,在体内吸收的过程中亦会体现相互的影响,同时亦印证了中药配伍合煎用药的合理性。本研究从化学成分层面阐明了柴胡、白芍二者配伍对体内成分及代谢产物的整体影响,揭示了二者配伍的科学内涵,明确了柴胡、白芍二者配伍协同增效的物质基础。