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目的:本实验通过建立反流性食管炎(Reflux Esophagitis,RE)动物模型(单纯酸反流、混合反流)及假手术动物模型,观察各模型组动物存活情况及食管标本肉眼表现,食管标本组织学检测,并应用免疫组织化学方法检测TNF-α、Caspease-3、Survivin的表达情况。探讨反流对食管下段粘膜细胞凋亡相关因子作用的研究,为临床防治胃食管反流性疾病提供试验性理论依据。方法:选择健康雄性SD大鼠200只,体重(220-280)克,随机分为三组:假手术组(A组)40只,单纯酸反流组(B组)80只,混合反流组(C组)80只。反流模型制备成功后,分别于术后第20、24、28、32周各组随机选取8只大鼠分三批颈椎离断处死,后立即取出大鼠食管组织,用苏木素伊红(HE)染色,光镜下观察各组大鼠食管粘膜上皮病理变化,采用免疫组织化学方法测定食管粘膜上皮TNF-α、Caspease3、Survivin的表达。实验结果均以均数±标准差( x±s)表示,各组间比较采用单因素方差分析,组内比较采用t检验,应用SPSS11.5统计分析软件对实验数据进行统计学处理,P<0.05为有统计学意义。结果:术后B组与C组大鼠体重明显下降,与对照组有明显差异(P<0.01);术后20天,存活大鼠大部分体重恢复到术前水平,饮食、活动基本正常,体重逐渐增长,但与假手术组比较增长较慢。大鼠死亡时间多发生在术后一个月内,死亡原因多因术后进食伤口感染、出血、吻合口瘘、腹腔感染、肺部感染等多种原因引起。大体观察:A组大鼠食管颜色淡红,有光泽,粘膜光滑;B组大鼠模型20周时部分大鼠出现食管颜色变淡白,粘膜稍粗糙,随时间延长出现病变的大鼠数量增多,粘膜增厚及粗糙感亦加重;C组大鼠模型与B组大鼠模型相比:病变表现较同期B组大鼠明显加重,24周时部分大鼠食管扩张,可见粘膜层出现点状糜烂,粘膜增厚亦明显;28周时病变大鼠数量增多,食管粘膜明显增厚,粘膜皱襞灰白色斑块加重,导致食管粘膜凹凸不平。32周时灰白色斑块明显隆起,呈脑沟回状,与食管的长轴平行。光镜下观察,HE染色,A组大鼠食管各层结构完整,粘膜厚薄适中,粘膜表面可见较少的角化。B组大鼠模型随时间延长,粘膜层逐渐增厚,基底细胞层及棘细胞层细胞数目增多,角化层逐渐增厚,32周时可见粘膜层表层出现小的糜烂;C组大鼠模型病变表现较同期B组大鼠明显加重,除出现上述病变外,24周时部分大鼠食管局部粘膜基底细胞层明显增生,部分粘膜组织向外呈乳头样突起,棘细胞层细胞层次明显增加,出现颗粒层细胞增加,细胞角化现象逐渐明显;随造模时间延长,粘膜明显增生的范围不断增大,从食管与十二指肠及胃吻合口手术部位逐渐发展至食管中段乃至上段,乳头样突起亦明显增多;与此同时,贲门部胃黏膜上皮发生肠上皮化生,杯状细胞明显增多。28周时部分模型大鼠食管粘膜明显增生区向外膨出形成乳头状瘤,粘膜表面有大量的不完全角化;部分区域上皮角向粘膜下层插入,基底细胞增生明显;发生不典型增生,并可见散在的单个细胞浆嗜酸性增强,细胞核固缩。此三者皆为食管鳞状细胞癌的癌前病变表现。C组32周时上述病变进一步加重,但仍未出现典型的食管鳞状细胞癌病变。免疫组化:在A组各时间点,TNF-α蛋白在棘细胞层可见微弱的阳性表达。B组、C组TNF-α蛋白的表达呈逐渐增加趋势;与同期B组相比,28、32周C组大鼠模型TNF-α蛋白的表达明显增加(P<0.05)。Caspease-3正常对照组的基底细胞层及棘细胞层细胞中有基础阳性表达,B组、C组随造模时间延长,阳性细胞表达率逐渐升高,阳性细胞的表达也从基底细胞增加至棘细胞层乃至全层;C组与同期B组大鼠模型相比,第28、32周粘膜阳性细胞表达率明显升高(P<0.05)。在正常对照组各时间点,Survivin蛋白均未见阳性表达, 20周时B组各动物食管粘膜层内未见细胞核Survivin蛋白的阳性表达,但在棘细胞层部分细胞浆中可见阳性表达,并随时间延长表达逐渐增多,28、32周时阳性细胞表达数目明显增多,阳性表达部位灰度值降低;C组大鼠模型各时间点阳性细胞灰度值及阳性细胞数较A组明显增高(P<0.05)。结论:单酸返流、混合返流手术均能导致大鼠模型食管粘膜上皮凋亡的改变,混合返流手术较单酸返流手术的表现更为明显,混合返流手术后24周光镜下可出现粘膜上皮基底细胞层及棘细胞层细胞层次增加,细胞过度角化;并可见非典型增生的区域的细胞凋亡的增加。免疫组织化学法检测可见模型组TNF-α表达的上调,Caspease3表达上调,Survivin蛋白表达升高,提示胃酸返流、十二指肠液返流等刺激可通过影响一系列凋亡相关基因蛋白的表达来导致食管粘膜上皮细胞的凋亡。