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猪链球菌(Streptococcus suis, SS)是猪的重要病原菌,可引起猪的脑膜炎、败血症、关节炎及急性死亡。SS2的毒力最强,流行最广。为进一步了解SS致病机制,深入探讨了小RNA(sRNA)rssO4与rss05对SS2脑膜炎分离株P1/7的影响。应用比较基因组学方法,揭示SS2脑膜炎分离株SC070731特有一个105K基因岛及新的毒力相关基因。1. sRNA rssO4和rss05对SS2脑膜炎分离株P1/7毒力的影响本课题组前期对P1/7转录组测序发现29个sRNAs,为探究sRNA对SS毒力的影响,挑选出分别在猪脑脊液中上调表达的sRNA rssO4和在猪血液中上调表达的sRNA rssO5深入研究。利用温度敏感型穿梭质粒pSET4s定点敲除P1/7的rss04和rss05基因,成功构建缺失株△rssO4和△rssO5,以及互补株C-rssO4和C-rssO5.斑马鱼毒力试验显示,两个缺失株毒力显著低于野毒株和相应互补株；猪全血存活试验表明,与野生株相比,缺失株△rssO5在猪全血中的存活能力显著降低(*P<0.05),而△rssO4与野生株目比差异不显著；HEp-2黏附试验表明,与野生株相比,缺失株△rssO4和△rssO5对HEp-2的黏附率分别下降了83%和77%(***P<0.001),而相应的互补株黏附率与野生株相当。上述结果表明,sRNAs rssO4和rss05参与调控SS毒力。2.SS2脑膜炎分离株SC070731基因组分析本课题组前期从脑膜炎病猪脑部分离一株SS2菌株SC070731,且斑马鱼毒力试验显示该菌株毒力比SS2脑膜炎毒力株P1/7更强.为深入阐明该菌株致病机理,采用Solexa测序方法对SC070731进行全基因组测序。结果显示：该菌基因组全长2138568 bp,平均GC含量41%,有56个tRNA基因和4个rRNA操纵子。预测含1 933个蛋白编码序列,存在96.7%(57/59)的毒力因子；预测含28个编码表面蛋白的基因,其中10个被报道为毒力相关因子；另外,发现4个新的候选毒力因子：RTX毒素家族胞外蛋白A,5’核苷酸酶,含组氨酸三联体和富亮氨酸区的蛋白,类枯草杆菌丝氨酸蛋白酶。与NCBI上公布的7株SS2菌株的全基因组序列相比较,SC070731特有一个105K基因岛(GI)。深入分析发现,该GI含有乳酸链球菌素(Nisin)基因、前噬菌体基因Ph070731、RelBE毒素抗毒素基因,以及抗性基因大环内酯类流出蛋白A、MsrA蛋白、rRNA(腺嘌呤N6)甲基转移酶。通过液相色谱-质谱联用方法,从SC070731菌体蛋白中检测到Nisin,证实该菌可产生Nisin。采用PCR方法,从15株病猪SS分离株中检测GI特有的Nisin、Nisin免疫蛋白、毒素RelE及抗毒素RelB等4个蛋白编码基因的分布情况,结果显示,这4个基因为SC070731菌株所特有,其它菌株中未发现。