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蜂胶是蜜蜂从不同的植物收集的一种树脂蜂巢产品,其主要的活性成分有黄酮类、萜烯、酚酸及其衍生物类等,它具有抑菌、抗氧化、免疫调节和降血糖等生物活性。东北黑蜂具有很强的抗冻性,零下儿十度可以安全越冬,但是关于黑蜂蜂胶有效成分及其活性功能的研究工作较少。本文以抗氧化活性和抑菌活性为指标,进行了东北黑蜂蜂胶活性物质的极性筛选;研究了活性物质的超声辅助提取技术及其溶出动力学模型;采用扫描电镜、紫外、红外、GC-MS和LC-MS等分析方法对提取物进行了微观结构表征和指纹图谱分析。 主要研究工作及其结论如下: (1)东北黑蜂蜂胶抗氧化和抑菌活性物质的极性筛选:采用甲醇、乙醇、水、乙酸乙酯、苯和三氯甲烷等不同极性的溶剂萃取东北黑蜂蜂胶中的活性物质,研究了其活性成分存在的极性范围。研究结果表明,东北黑蜂蜂胶不同溶剂的萃取物均具有一定的抗氧化活性,其中甲醇提取物(ME)和乙醇提取物(EE)的抗氧化活性更最强;不同极性的提取物对除大肠杆菌以外的其它试验菌(金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、李斯特菌)均具有抑制生长的作用,且甲醇和乙醇提取物的抑菌性最强。通过上述生物活性的测定,确定乙醇为东北黑蜂蜂胶活性成分提取的最佳溶剂。 (2)东北黑蜂蜂胶活性组分的单频逆流超声辅助提取:以黄酮和三萜总提取率为指标,研究了乙醇浓度、提取温度、超声时间、占空比和液料比对黄酮和三萜总提取率的影响。结果表明,液料比、提取温度、提取时间和占空比四个因素对目标提取物的提取效果影响较为显著。根据单因素试验方差分析结果,采用响应面实验设计与分析方法得到了东北黑蜂蜂胶主要活性成分最优提取条件为:乙醇浓度80%,液料比32∶1 mL/g、提取温度53℃、提取时间16 min、占空比10 s/5 s,在此条件下黄酮和三萜的提取率为61.11%,比不加超声的黄酮和三萜提取率提高了24%。 (3)东北黑蜂蜂胶活性组分在超声场下溶出动力学模型:对东北黑蜂蜂胶中黄酮和三萜的单频逆流脉冲超声辅助提取过程用二级动力学模型进行拟合发现,拟合度高,可以用于模拟、预测蜂胶中黄酮和三萜的逆流脉冲超声辅助同时提取过程与提取效果。 (4)东北黑蜂蜂胶醇提物指纹图谱的分析:通过对东北黑蜂蜂胶提取物进行电镜、红外和紫外光谱表征,确定了东北黑蜂蜂胶提取物的特征峰。东北黑峰蜂胶乙醇提取物在紫外区有2个吸收峰,在292 nm下有一个最强吸收峰,在356nm有一个很弱的吸收峰,推断可能是异黄酮、二氢黄酮及二氢黄酮醇类化合物。蜂胶提取物的红外光谱图上有15个特征峰,分别推断为烷烃类化合物、萜烯类化合物、黄酮类化合物、醇及酚。蜂胶醇提物的挥发性成分的主要活性物质是萜类化合物,分别为大根香叶烯、杜松烯、愈创木醇和芹子烯。通过蜂胶提取物的LC-MS的质谱图和标准品图推测出了7种可能的物质,分别为苯甲醛、咖啡酸、阿魏酸、香百酸、柯因、异鼠李素、山奈素,准确性还需要进一步通过核磁共振分析确认。