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鸡毒支原体（Mycoplasma gallisepticum,M. gallisepticum）是引起鸡呼吸困难、气囊炎等症状的慢性呼吸道疾病的病原体,其诱导的细胞凋亡与其致病机制密切相关。支原体核酸酶样蛋白是支原体重要的毒力蛋白,在其诱导细胞捌亡的过程中发挥重要作用。因此,研究鸡毒支原体核酸酶样蛋白对鸡毒支原体的致病机制研究及鸡毒支原体病的防控具有重要意义。本研究将鸡毒支原体MGA0676蛋白进行序列分析及原核表达后,通过核酸酶切试验及酶谱试验对其核酸酶活性进行鉴定,结果发现MGA0676蛋白具有一个链球菌耐热核酸酶（staphylococcal nuclease,SNC）功能区,原核表达的rMGA0676蛋白可以降解质粒DNA、单链DNA及宿主细胞的核酸底物,具有Ca2+依赖性,在37℃及49℃具有较好的酶切活性,缺失SNC区的rMGA0676△SNC蛋白不能降解核酸底物,这表明MGA0676蛋白是鸡毒支原体具有Ca2+依赖性耐热核酸酶,其核酸酶功能区为SNC区域。为研究MGA0676蛋白的生物学特性,利用膜蛋白免疫印迹及免疫胶体金电镜技术鉴定其膜相关性,采用细胞Annexin V/PI方法及流式细胞术检测体外MGA0676蛋白诱导鸡胚细胞（DF-1）凋亡情况,采用激光共聚焦观察MGA0676蛋白在细胞上的定位进行观察,同时采用HE、IHC及TUNEL方法对rMGA0676蛋白处理后雏鸡的组织病理变化进行分析,并对SNC区域的功能进行鉴定；结果发现MGA0676存在于鸡毒支原体的膜蛋白中,分布于鸡毒支原体膜表面,随着rMGA0676浓度（0.1μM、0.25μM、0.5μM）的增加及MGA0676蛋白在宿主细胞内表达时间（12h、24h、36h）的增长,MGA0676蛋白诱导细胞凋亡的量显著性增加（p<0.01）,体内试验发现rMGA0676可以定位于雏鸡气管、肺、胸腺、脾脏及法氏囊组织并导致组织发生病变,诱导细胞凋亡,同时发现其存在于DF-1细胞核周围及细胞核,缺失了SNC功能区的MGA0676蛋白不能诱导DF-1细胞凋亡,可以内化进入细胞,但不能进入细胞核,上述结果表明MGA0676蛋白是鸡毒支原体一个膜相关的蛋白质,定位于鸡毒支原体的细胞表面,具有内化及诱导细胞凋亡的功能,其诱导细胞凋亡功能区为SNC区,该区域影响MGA0676蛋白进入细胞核,但不影响其内化细胞。为进一步研究MGA0676蛋白内化细胞的特性及致病机理,采用间接免疫荧光及激光共聚焦技术对MGA0676内化细胞的机理进行研究,并对MGA0676蛋白的细胞靶蛋白采用pulldown、质谱测序、免疫共沉淀及激光共聚焦技术进行研究,结果发现抑制Caveolin细胞内吞途径,抑制了rMGA0676蛋白内化DF-1细胞,鸡毒支原体MGA0676蛋白与鸡DF-1细胞的NEDD8激活酶调节亚基（NEDD8-activating enzyme E1regulatory subunit,NAE）蛋白相互作用,缺失了MGA0676蛋白的SNC区域或NAE蛋白的Thif区域均阻止了MGA0676蛋白与NAE蛋白的相互作用,这表明毒支原体MGA0676蛋白通过依赖于Caveolin的细胞内吞作用进入细胞,其SNC区域与鸡DF-1细胞的NAE蛋白的Thif区域相互作用。为进一步研究MGA0676蛋白与宿主NAE蛋白相互作用所引起的生物学效应与细胞凋亡的关系,采用小RNA干扰抑制DF-1细胞内源性的NAE蛋白的表达,证实MGA0676与其的相互作用对细胞凋亡的影响,并通过检测细胞内NF-κB活性,研究DF-1细胞NF-κB的激活与rMGA0676诱导细胞凋亡的关系,结果发现,抑制DF-1细胞NAE表达阻止了rMGA0676蛋白及鸡毒支原体诱导的细胞凋亡,rMGA0676蛋白可以激活宿主细胞NF-κB信号途径,阻断MGA0676与NAE相互作用抑制了rMGA0676蛋白诱导的NF-κB的激活,抑制细胞内源性的NF-κB,抑制了rMGA0676蛋白诱导的细胞凋亡,这表明鸡毒支原体MGA0676蛋白与DF-1细胞NAE蛋白相互作用激活宿主细胞NF-κB信号通路,诱导细胞凋亡。本研究证实了鸡毒支原体MGA0676蛋白是鸡毒支原体一个膜相关的核酸酶蛋白,揭示了MGA0676蛋白引起的宿主细胞凋亡的分子致病机理,阐明了NAE及NF-κB在鸡毒支原体MGA-0676蛋白在引起细胞凋亡中发挥的作用,为深入探讨鸡毒支原体引起的细胞凋亡的分子致病机理提供了重要的理论依据。