论文部分内容阅读
目的：比较黄连解毒汤与茵陈蒿汤中其他药物与栀子合用对其肝毒性及作用环节的影响，初步探索减轻栀子肝毒性的可能成分，为临床的安全用药提供参考。 方法： (1)栀子水煎液给予Wistar大鼠三天造成动物肝损伤的剂量的研究：给予大鼠4.5g/kg、9g/kg、18g/kg不同剂量的栀子水煎液3天，用全自动生化分析仪测ALT、AST、ALP、TBA，取肝脏，计算肝脏指数。 (2)“黄连解毒汤”对栀子肝毒性的影响：10倍于临床用量的栀子与“黄连解毒汤”制成水煎液，大鼠灌胃给药3天，用全自动生化分析仪测ALT、AST、ALP、TBA，取肝脏，计算肝脏指数。 (3)“茵陈蒿汤”对栀子肝毒性的影响：10倍于临床用量的栀子与“茵陈蒿汤”制成水煎液，大鼠灌胃给药3天，用全自动生化分析仪测ALT、AST、ALP、TBA，取肝脏，计算肝脏指数。 (4)栀子的肝毒性机制研究及“黄连解毒汤”、“茵陈蒿汤”对其的影响：10倍于临床用量的栀子与“黄连解毒汤”、“茵陈蒿汤”制成水煎液，大鼠灌胃给药3天，测定肝组织中SOD活性、MDA含量、GSH-PX活性、TNF-α的含量，TUNEL法测肝组织中的细胞凋亡；免疫组化法测肝组织中调亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达。 (5)栀子苷致大鼠肝毒性的时-效、量-效关系：栀子苷低剂量125mg/kg、栀子苷中剂量250mg/kg、栀子苷高剂量500mg/kg给予大鼠，在给药后的3、7、14天取血，全自动生化分析仪测ALT、AST、ALP、TBA，给药14天后取肝脏，计算肝脏指数。 (6)基于细胞水平的栀子苷肝毒性研究：MTT法测栀子苷与京尼平对肝细胞生存率的影响；选用黄芩素、大黄素对HL7702细胞生长没有抑制作用的浓度与京尼平合用，MTT法测检测合用组与京尼平组对肝细胞生存率的影响；同样的干预方法，检测上清液中ALT、AST、ALP、LDH水平，用倒置显微镜进行细胞形态学的观察。 结果： (1)9g/kg、18g/kg的栀子水煎液给予大鼠三天，与正常对照组相比，ALT、AST、ALP、TBA均极显著升高；肝脏指数有明显的增大；18g/kg剂量组动物死亡率为25％。 (2)栀子、黄连解毒汤与正常对照组相比，肝脏指数都显著升高；黄连解毒汤组的肝脏指数与栀子组相比极显著降低。栀子与正常对照组相比，ALT、AST、ALP、TBA极显著升高；黄连解毒汤与正常对照组相比，ALT显著降低，AST、ALP、TBA无明显差异；黄连解毒汤与栀子组相比，ALT、AST、ALP、TBA极显著降低。 (3)栀子、茵陈蒿汤组与正常对照组相比，肝脏指数显著升高；茵陈蒿汤组的肝脏指数与栀子组相比无明显差异。栀子与正常对照组相比，ALT、AST、ALP、TBA均极显著升高；茵陈蒿汤与正常对照组相比，ALT、AST极显著升高，ALP、TBA显著升高；茵陈蒿汤与栀子组相比，ALT、ALP、TBA均显著降低。 (4)栀子组与正常对照组相比，SOD、SOD/MDA及GSH-PX极显著降低，MDA显著升高；黄连解毒汤与正常对照组相比，SOD、MDA、SOD/MDA及GSH-PX无明显差异，与栀子组相比，SOD、SOD/MDA及GSH-PX极显著升高，MDA显著降低。茵陈蒿汤与正常对照组相比，SOD显著降低，GSH-PX极显著降低，MDA、SOD/MDA无明显差异，与栀子组相比，SOD、SOD/MDA极显著升高。 栀子与正常对照组相比，大鼠肝组织中TNF-α的量极显著升高；10倍于临床用量的黄连解毒汤与正常对照组相比，无明显差异，与栀子组相比，大鼠肝组织中TNF-α的含量极显著降低。茵陈蒿汤与正常对照组相比，大鼠肝组织中TNF-α的含量极显著升高，与栀子组相比，大鼠肝组织中TNF-α的含量无明显差异。 栀子9g/kg组肝组织的累积光密度与凋亡指数与正常对照组相比显著升高，黄连解毒汤组与正常对照组相比无明显差异，与栀子组相比极显著降低。茵陈蒿汤组的累积光密度与凋亡指数与正常对照组相比显著升高，与栀子组相比凋亡指数显著降低。 栀子9g/kg组肝组织细胞中的Bax、Bax/Bcl-2与正常对照组相比显著升高，黄连解毒汤组Bax、Bcl-2与正常对照组相比显著升高，Bax/Bcl-2没有明显差异，与栀子组相比Bax/Bcl-2极显著降低 栀子12g/kg组肝组织细胞中的Bax、Bax/Bcl-2与正常对照组相比显著升高，Bcl-2显著降低；茵陈蒿汤组Bcl-2与正常对照组相比显著降低，Bax/Bcl-2显著升高，与栀子12g/kg组相比Bax、Bax、Bax/Bcl-2均没有显著差异。 (5)本实验中栀子苷给药3天后，高剂量组的动物活动减少，体重减轻，血清学指标ALT、AST、TBA、ALP显著升高。解剖发现，高剂量中死亡的动物肝明显肿大。大鼠给予栀子苷7天与14天时，给药组动物的ALT、AST与正常对照组相比无明显差异，高剂量250mg/kg组的TBA与正常对照组相比显著升高。 (6)各浓度的栀子苷与正常对照组相比，没有表现出对HL7702细胞生长的抑制。而给予京尼平，随着京尼平浓度的升高，细胞活力明显下降，与正常对照组相比，1000、500、250μmol/L组表现出极显著的差异，并且京尼平对细胞活力的抑制率呈浓度依赖性。 黄芩素、大黄素均能增加京尼平对肝细胞的抑制率。京尼平使细胞上清液中AST、ALP、LDH水平明显升高(P<0.01或P<0.05)，黄芩素、大黄素和京尼平合用与京尼平单独使用相比AST、LDH有明显的升高。京尼平及京尼平与黄芩素、大黄素合用组与正常对照组相比，呈多角形的细胞增加且皱缩、变圆，同时细胞数目减少。 结论： (1)栀子肝毒性的机制与氧化应激、炎症反应诱导肝细胞的坏死与凋亡有关；黄连解毒汤可以通过提高清除自由基的酶的活性、抑制炎症反应，抑制栀子引起的肝细胞损伤而降低栀子肝的毒性。茵陈蒿汤也可以在一定程度通过增高清除活性氧的酶的活性、抑制炎症反应、抑制栀子引起的肝细胞坏死与凋亡来抑制栀子的肝毒性。 (2)栀子与黄连解毒汤、茵陈蒿汤中的其他中药组方使用可减轻其肝毒性。黄连解毒汤较茵陈蒿汤的肝毒性更小。 (3)栀子的肝毒性主要成分是栀子苷的代谢产物京尼平。黄连解毒汤、茵陈蒿汤中减轻京尼平肝毒性的药效物质可能是黄芩素与大黄素以外的成分。